SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4728—2016 椰子败生类病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Coconut tinangaja viroid 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4728—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局。 本标准起草人：李伟东、潘英文、刘福秀、韩玉春、敖苏 行业标准信息服务平台 1 SN/T4728—2016 椰子败生类病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了椰子败生类病毒的检疫鉴定方法。 本标准适用于棕榈科植物种果、苗木及植株中椰子败生类病毒的检疫和鉴定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3椰子败生类病毒的基本信息 学名：Coconut tinangaja viroid 缩写：CTiVd 中文名：椰子败生类病毒 分类地位：马铃薯纺锤形块茎类病毒科Pospiviroidae，椰子死亡类病毒属Cocadiroid 椰子败生类病毒的其他信息参见附录A。 4方法原理 椰子败生类病毒的基因组为环状或线状，核酸为单链核糖核酸（ssRNA)。根据该类病毒引发的植 株症状、基因组RNA序列等进行PCR特异性检测，通过电泳条带大小或Ct值进行结果判定。 业标准信： 5仪器设备和主要试剂 5.1 仪器设备 PCR仪、荧光定量PCR仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机，台式 小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡震荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统、电子分析天平（感 量为0.1mg）等。 5.2主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯。RT-PCR检测试剂（见附录B）、荧光定量PCR检测试剂（见 附录 C)。 9 取样和制样 在检疫现场观察植株受害的症状，CTiVd为害症状描述参见A.3。对疑似类病毒症状的植株，每株 1 SN/T4728—2016 采集症状叶片0.2g～1g，单独制样；没有症状的植株或无法观察症状的植物产品按照SN/T2122规定 抽取代表性样品，每份0.2g~1g，单独制样。 7 检测鉴定 7.1 RT-PCR凝胶电泳检测 RT-PCR凝胶电泳检测见附录B。 7.2 荧光定量PCR检测 荧光定量PCR检测见附录C。 8结果判定 样品经RT-PCR检测为阳性，或荧光定量PCR检测为阳性，即可判定样品中存在CTiVd。 9样品保存 9.1 样品保存 检测结果为阳性的植物样品保存于一20℃或者一80℃冰箱中。保存样品做好登记和标识工作。 9.2 结果记录与资料保存 完整的实验记录要包括：样品的来源、种类、时间、实验检测时间、地点、方法和结果，并有实验人员 的签字。RT-PCR检测电泳阳性结果照片，实时荧光PCR扩增曲线图片。 行业标准信息服务平台 2