ICS67.050 CCSX83 T/GDFDTAEC02-2022团 体 标 准 保健食品中低聚木糖的测定 -高效液相色谱法 DeterminationofXylo-oligosaccharidesinhealthfood-HighPerformance LiquidChromatography 2022-07-06发布 2022-07-06实施 广东省食品药品审评认证技术协会发布 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC02-2022 前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、无限极（中国）有限公司提出。 本文件由广东省食品药品评审认证技术协会归口。 本文件起草单位：广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、无限极(中国)有限公 司、汤臣倍健股份有限公司、华测检测认证集团股份有限公司、广州汇标检测技术中心、清远市林中宝 生物科技有限公司。 本文件主要起草人：张志舟、张方圆、窦文渊、孙红梅、郑海岚、冯齐、黄绮敏、江志鹏、魏鲜娥、 黎小兰、孙宇、周璇、杨群华、温恒、廖明凯、唐静、张飞、蓝燕玲。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC02-2022 1保健食品中低聚木糖的测定-高效液相色谱法 1范围 本文件规定了保健食品中低聚木糖含量的测定方法。 本文件适用于保健食品片剂、固体饮料、口服液中低聚木糖含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样中的低聚木糖经高温酸水解后，样液经PMP衍生，三氯甲烷净化后，以C18反相色谱柱分离， 液相色谱-紫外检测器测定，根据保留时间定性，外标法定量。 5试剂和材料 除非另有规定，本文件所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1乙腈：色谱纯。 5.1.2甲醇。 5.1.3浓硫酸。 5.1.4氢氧化钠。 5.1.5衍生剂：1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)（CAS：89-25-8）。 5.1.6三氯甲烷。 5.1.7浓盐酸。 5.1.8无水乙醇。 5.2溶液配制 5.2.1氢氧化钠溶液（5%）：称取5g氢氧化钠，用水溶解，定容至100mL，摇匀。 5.2.2氢氧化钠溶液（0.3mol/L）：称取1.2g氢氧化钠，用水溶解，定容至100mL，摇匀。 5.2.3硫酸溶液（4mol/L）：量取7mL水于10mL比色管中，加入2.00mL浓硫酸。 5.2.4PMP甲醇溶液（0.5mol/L）：称取0.44gPMP，加入5mL甲醇溶解。 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC02-2022 25.2.5盐酸溶液（0.3mol/L）：移取浓盐酸1.35mL于50mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。 5.2.6乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加入适量的水溶解，用水定容至1000mL，经 0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。 5.3标准品 D-木糖：CAS：58-86-6，纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.4标准溶液配制 5.4.1标准储备溶液（5.00mg/mL）：准确称取D-木糖50mg(准确至0.01mg)，用水溶解并定容至10 mL，摇匀。 5.4.2标准工作溶液：准确吸取5.00mg/mL木糖标准储备溶液5.00mL于25mL容量瓶，用水定容至 刻度，溶液浓度为1.00mg/mL，取适量稀释成0.00mg/mL、0.010mg/mL、0.020mg/mL、0.100mg/mL、 0.200mg/mL、0.500mg/mL浓度的标准工作溶液。 6仪器设备 6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 6.2电子分析天平：感量为0.00001g。 6.3超声波提取仪：功率≥800W。 6.4离心机：转速≥4000r/min。 6.5恒温水浴锅。 6.6旋涡混合器。 7试验步骤 7.1样品水解 7.1.1水解前样品溶液的制备M1：精密称取0.5-2g（木糖含量在10-250mg之间，固体样品取有代表 性的样品20g粉碎均匀后取样测试，液体样品需摇匀后再取样测试）于50mL离心管中，加水至25mL， 超声提取20min，加入无水乙醇至刻度，摇匀后，继续超声10min，4000r/min离心5min，准确移取 上清液25mL于烧杯中沸水浴蒸干，残渣准确加入25mL水溶解，该溶液为水解前样品溶液M1；另取 1mL水解前样液过0.45μm水相滤膜，滤液供衍生化反应使用。 （注：如在测定低聚木糖过程中，遇到样品超声提取后成为糊状样液、离心不能沉淀的情况，可直接用无水乙醇进行溶 解样品，超声提取完毕后，静置过夜，离心，其余步骤不变。） 7.1.2水解后样品溶液制备M2：准确移取水解前样液M110mL于50mL水解管中，加入1.8mL硫酸 溶液（4mol/L）盖紧盖子，于100℃恒温水浴锅中水解2h，后冷却至室温，用5%氢氧化钠溶液中和 水解液至pH值6-7，转入100mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即为水解后样品溶液M2，取1mL 水解后样液过0.45μm水相滤膜，滤液供衍生化反应使用。 7.2衍生化反应 分别取标准工作溶液（0.00、0.010、0.020、0.100、0.200、0.500、1.00mg/mL的标准溶液）、水 解前、水解后样品溶液M1、M2各400μL置于具塞10mL离心管中，向上述离心管中分别加入0.5mol/L PMP甲醇溶液以及0.3mol/L氢氧化钠溶液各400μL，充分混匀后，于70℃水浴衍生化反应100min， 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC02-2022 3放冷，加入0.3mol/L盐酸溶液500μL，混匀；加入约2mL三氯甲烷涡旋振荡30s，静止分层后，弃 去下层三氯甲烷溶液，重复以上步骤2次，剩余溶液过0.45μm有机滤膜，滤液供液相色谱仪测定使用。 7.3色谱参考条件 C18色谱柱：4.6mm×250mm，粒径5μm或等效； 流动相：0.02mol/L乙酸铵-乙腈（76:24）； 流速：1.0mL/min； 柱温：30℃； 检测波长：250nm； 进样量：2μL。 7.4测定 将衍生化后的标准工作溶液和试液分别进样，以标准系列溶液峰面积为纵坐标、浓度为横坐标绘制 标准曲线，以保留时间定性，峰面积外标法定量。根据工作曲线得到试样溶液中木糖的浓度，色谱图见 附录A。 8结果计算 试样中水解前样品中木糖含量X1以质量分数计，数值以克每100克（g/100g），按式（1）计算： 10mX1 1VC………………………………………（1） 式中： X1—水解前样品中木糖的含量（g/100g）； C1—由工作曲线得出的水解前样品中木糖的浓度，（mg/mL）； V—定容体积，（50mL）； m—试样质量，单位为克（g）； 试样中水解后样品中木糖含量X2以质量分数计，数值以克每100克（g/100g），按式（2）计算： 10mX2 2NVC…………………………………（2） 式中： X2—水解后样品中木糖的含量（g/100g）； C2—由工作曲线得出的水解后样品中木糖的浓度，（mg/mL）； V—定容体积，（50mL）； m—试样质量，单位为克（g）； N—样品水解过程中的稀释倍数，该方法为10； 试样中各种低聚木糖（以木二糖计）含量，按式（3）计算： F X X X  ) (1 2  ………………………………（3） 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC02-2022 4X—样品中低聚木糖的含量（以木二糖计）（g/100g）； X2—水解后样品中木糖的含量（g/100g）； X1—水解前样品中木糖的含量（g/100g）； F—木糖与低聚木糖的转换系数，其中木糖转换为低聚木糖（以木二糖计）的系数为0.940（木糖 分子量为：150.13，木二糖分子量为282.24）； 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 9精密度 9.1重复性 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 9.2再现性 在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC02-2022 5附录A (资料性) 木糖标准溶液色谱图 木糖标准溶液色谱图见图A.1 图A.1.木糖标准溶液色谱图 _______________________________ 全国团体标准信息平台