ICS67.050 CCSX83 团 体 标 准 T/GDFDTAEC03-2022 保健食品中总皂苷的测定-分光光度法 DeterminationoftotalginsenosidesinhealthfoodbySpectrophotometry 2022-07-06发布 2022-07-06实施 广东省食品药品评审认证技术协会发布 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC03—2022 前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、完美（广东）日用品有限公司 提出。 本文件由广东省食品药品评审认证技术协会归口。 本文件起草单位：广东省测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、华测检测认证集团股份有限 公司、广州金至检测技术有限公司、广州汇标检测技术中心、完美（广东）日用品有限公司、无限极(中 国)有限公司。 本文件主要起草人：林晨、张方圆、郁晓艺、吴平、梁友、胡英、陈菊英、孙红梅、刘贤钊、陈炎 欢、周璇、朱桂芳、陈晓强、龙志曦、张胜宜、黄玲珠、谭维嘉、彭焱辉。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC03—2022 1保健食品中总皂苷的测定-分光光度法 A 1范围 本文件规定了保健食品及其原料中总皂苷含量的分光光度测定方法。 本文件适用于保健食品及其原料中总皂苷含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样用水饱和正丁醇提取总皂苷类成分，经氨试液除杂后，试样中的皂苷类成分在高氯酸的作用下 与香草醛反应，产生特征的紫红色，其颜色的深浅与总皂苷含量成正比，用分光光度法测定其吸光度值 并与标准系列进行比较定量。 5试剂和材料 除非另有说明，本文件所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。 5.1试剂 5.1.1正丁醇。 5.1.2无水乙醚。 5.1.3甲醇。 5.1.4氨水。 5.1.5高氯酸。 5.1.6冰乙酸。 5.1.7香草醛。 5.1.8氯化钠。 5.2试剂配制 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC03—2022 25.2.1香草醛溶液(5%)：称取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL，混匀。 5.2.2水饱和正丁醇溶液：取正丁醇适量，加入适量水，充分振摇，静置使分层，上层液体即为水饱和 正丁醇。 5.2.3氨试液(40%)：量取400mL氨水，用水稀释至1L，混匀。 5.3标准品 5.3.1对照品：人参皂苷Re(CAS号：52286-59-6)。 5.4标准溶液配制 5.4.1人参皂苷Re标准储备液(0.2mg/mL)：准确称取10.0mg人参皂苷Re对照品（精确至0.1mg）于 50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。 6仪器设备 6.1可见分光光度计。 6.2离心机：4000转/min。 6.3分析天平：精密度0.0001g。 6.4超声提取器：50/60Hz，1500W。 6.5温控氮吹仪。 6.6涡旋振荡器。 7分析步骤 7.1试样制备 7.1.1固体试样 称取已粉碎混合均匀（过50目筛）的待测试样1g（精确至0.001g），置于50mL离心管中。加 入25mL水饱和正丁醇（5.2.2），涡旋混匀，超声30min后，4000转/min离心10min，转移上层液至 250mL分液漏斗。重复上述提取步骤两次，每次超声10min，合并正丁醇液。再以氨试液（5.2.3）洗 涤两次，每次50mL，上层液转移至100mL容量瓶中，用正丁醇（5.1.1）定容至刻度，备用。 注：如样品油脂含量高，可用无水乙醚去油后再用水饱和正丁醇提取。 7.1.2液体试样 含乙醇的液体试样，吸取混合均匀的待测试样10.0mL置水浴上挥尽乙醇后，用水转移至250mL 分液漏斗中并加水至约25mL；非乙醇类的液体试样，直接移取10mL试样至250mL分液漏斗中并加 水至约25mL。依次加入25mL、20mL、20mL水饱和正丁醇溶液（5.2.2）分三次萃取（如发生乳化 现象，加入少量NaCl加速分层），合并正丁醇液。再以氨试液（5.2.3）洗涤两次，每次50mL，上层 液转移至100mL容量瓶中，用正丁醇（5.1.1）定容至刻度，备用。 注：如样品油脂含量高，可用无水乙醚去油后再用水饱和正丁醇提取。 7.2样品测定 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC03—2022 37.2.1标准曲线的制作 精密吸取人参皂苷Re标准溶液（5.4.1）0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL于10mL 具塞比色管中，置氮吹仪上80℃挥干溶剂，精密加入0.2mL香草醛冰乙酸溶液（5.2.1），再精密加入 0.8mL高氯酸（5.1.5），混匀，使残渣全部溶解，置60℃±1℃水浴中准确加热10min，取出，冰浴冷 却至室温后，精密加入5.0mL冰乙酸（5.1.6），摇匀。在30min内，用1cm比色皿于560nm波长处， 用空白管作参比测定各管的吸光度值。 7.2.2试样溶液的测定 精确移取适量7.1.1或7.1.2制备好的待测液（含待测组分约0.04mg~0.2mg）至10mL比色管中， 置氮吹仪上80℃挥干溶剂,加入0.2mL香草醛冰乙酸溶液（5.2.1），再加入0.8mL高氯酸（5.1.5）， 混匀，使残渣全部溶解，置60℃±1℃水浴中准确加热10min，取出，冰浴冷却至室温后，加入5.0mL 冰乙酸（5.1.6），摇匀后与标准溶液同法测定吸光度值。 7.2.3样品空白 取同体积试样溶液于10mL具塞比色管中，置氮吹仪上80℃挥干溶剂，加入0.2mL冰乙酸（5.1.6）， 再加入0.8mL高氯酸（5.1.5），混匀，使残渣全部溶解，置60℃±1℃水浴中准确加热10min，取出， 冰浴冷却至室温后，加入5.0mL冰乙酸（5.1.6），摇匀后与标准溶液同法测定吸光度值。 8结果计算 试样中总皂苷的含量按式（1）计算： 1000×m×100×× 0VVcX ……………………（1） 式中： X——试样中总皂苷的含量（以人参皂苷Re计），单位为克每百克（g/100g）或克每百毫升（g/100mL）； c——经试样背景校正后，由标准曲线算得被测液中人参皂苷Re质量，单位为毫克(mg)； V——被测定样液的定容体积，单位为毫升(mL)； V0——显色时吸取被测定样液的体积，单位为毫升(mL)； m——试样的称样量，单位为克(g)或毫升(mL)； 100——换算系数； 1000——换算系数。 9精密度 9.1重复性 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 9.2再现性 全国团体标准信息平台 T/GDFDTAEC03—2022 4在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。B_________________________________ _______________________________ 全国团体标准信息平台