SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4675.4—2016 出口葡萄酒中乳酸的测定 酶法 Determination of lactic acid in wine for export-Enzymatic method 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4675.4—2016 前言 SN/T4675《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为30个部分： SN/T 4675.1 出口葡萄酒中甘油的测定酶法； SN/T4675.2 出口葡萄酒中2.3-丁二醇的测定气相色谱法； SN/T4675.3 出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； SN/T4675.4 出口葡萄酒中乳酸的测定酶法； SN/T4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法； -SN/T4675.6 出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； SN/T 4675.7 出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法； SN/T4675.8 出口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定液相色谱法； SN/T4675.9 出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法； SN/T4675.10 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T4675.11 出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法； SN/T 4675.12 出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法； SN/T 4675.13 出口葡萄酒中2，4，6-三氯甲苯醚残留量的测定气相色谱-质谱法 SN/T 4675.14 出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法： SN/T4675.15 出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法； SN/T4675.16 出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T4675.17 出口葡萄酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.18 1二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法； 出国葡萄酒中 SN/T.4675.19 出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； SN/T4675.20 出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法； SN/T 4675.21 出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法； SN/T 4675.22 出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法； SN/T4675.23 出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法； SN/T4675.24 出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法； SN/T 4675.25 出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（L*a*b*）色空间法； SN/T4675.26 出口葡萄酒浊度的测定散射光法； SN/T 4675.27 出口葡萄酒碱性灰分的测定； SN/T4675.28 出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数； -SN/T4675.29 出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法； SN/T 4675.30 出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。 本部分为SN/T4675的第4部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本部分等同采用国际葡萄与葡萄酒组织（OIV)的方法OIV-MA-AS313-07《乳酸》。本部分在技术 内容上与该方法一致。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 1 SN/T4675.4—2016 本部分起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫 局、拜发分析系统销售（北京）有限公司。 本部分主要起草人：刘青、李志勇、宋阳、关丽军、刘朝霞、邵仕萍、刘董、曾静、廖冰君、郑璇 行业标准信息服务平台 Ⅱ SN/T4675.4—2016 出口葡萄酒中乳酸的测定 酶法 1范围 SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中D/L-乳酸含量的酶法测定方法。 本部分适用于葡萄酒中D/L-乳酸含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 首先将试样加水稀释，然后往比色皿依次加人缓冲液、反应液、试验稀释液和酶液进行反应，采用分 光光度计测定吸光度变化，利用吸光度差值定量。 在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）条件下，总乳酸（L-乳酸和D-乳酸）在L-乳酸脱氢酶（L-LDH）和 D-乳酸脱氢（D-LDH)所催化的反应中被氧化成丙酮酸。通常，反应向有利于乳酸方向进行。从反应产 物中除去丙酮酸可以使反应的平衡朝着生成丙酮酸的方向进行。 在L-谷氨酸存在时，在谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)催化反应中,丙酮酸转化成L-丙氨酸 一丙酮酸+NADH+H iPTL-丙氨酸+α-酮戊二酸 反应（3)：丙酮酸+L-谷氨酸一 反应生成的NADH量，通过测定在波长340nm处吸光度的增加而得到，NADH量与乳酸的原始 数量成正比。 注：通过反应（1)和反应（3)可以单独测定L-乳酸含量，通过反应（2)和反应（3)可以单独测定D乳酸含量 4试剂和材料 服 4.1 氢氧化钠（NaOH)。 4.2 甘氨酰甘氨酸（C,H.NzO）。 4.3 谷氨酸（C,H.NO）。 4.4 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）。 4.5 谷丙转氨酶（GPT）。 4.6 L-乳酸脱氢酶（L-LDH)。 4.7 D-乳酸脱氢酶（D-LDH)。 4.8 10mol/L氢氧化钠溶液：准确称取40.0g氢氧化钠，用水溶解，定容至100mL后，转移至塑料瓶 1