ICS 67.120.20 B 40 团体 标准 T/SHZSAQS 016—2020 绵羊双肌表型主效基因 mstn分子 检测技术规程 2020- 12 - 26发布 2020 -12 - 31实施 石河子市质量标准化协会 发布 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 016—2020 I 目 次 前言 ................................ ................................ ............... III 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 3.1 肌肉生长抑制素 (myostatin ，mstn) ................................ ................... 1 3.2 单链构象多态性 ................................ ................................ .. 1 4 主要试剂配制 ................................ ................................ ...... 1 4.1 20 mg/mL 蛋白酶K ................................ .............................. 1 4.2 柠檬酸（ ACD）抗凝剂 ................................ ............................. 1 4.3 1mol/L Tris ................................ ................................ .... 2 4.4 0.5M EDTA(pH8.0) ................................ ............................... 2 4.5 TE(pH8.0) ................................ ................................ ....... 2 4.6 PBS ................................ ................................ ............. 2 4.7 DNA抽提缓冲液 ................................ ................................ ... 2 4.8 30%丙烯酰胺 ................................ ................................ ..... 2 4.9 5×TBE缓冲液 ................................ ................................ ..... 2 4.10 10%过硫酸铵 ................................ ................................ .... 2 4.11 变性缓冲液 ................................ ................................ ..... 2 4.12 固定液 ................................ ................................ ......... 3 4.13 染色液 ................................ ................................ ......... 3 4.14 显影液 ................................ ................................ ......... 3 5 检测方法 ................................ ................................ .......... 3 5.1 样本采集 ................................ ................................ ........ 3 5.2 DNA提取 ................................ ................................ ......... 3 5.3 DNA浓度和纯度测定 ................................ ............................... 3 6 引物设计 ................................ ................................ .......... 3 7 PCR扩增 ................................ ................................ ........... 3 7.1 PCR反应体系 ................................ ................................ ..... 4 7.2 PCR反应条件 ................................ ................................ ..... 4 7.3 PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测 ................................ ....................... 4 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 016—2020 II 8 SSCP分析 ................................ ................................ .......... 4 8.1 聚丙烯酰胺凝胶的制备 ................................ ............................ 4 8.2 样品上样与电泳 ................................ ................................ .. 4 8.3 银染显影 ................................ ................................ ........ 4 9 结果判断 ................................ ................................ .......... 5 9.1 PCR扩增产物凝胶电泳检测 ................................ ......................... 5 9.2 SSCP检测 ................................ ................................ ........ 5 附录A（资料性附录） 绵羊 mstn基因PCR产物SSCP基因分型 ...................... 5 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 016—2020 III 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 本标准附录 A为资料性附录。 本标准起草单位：新疆农垦科学院畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：甘尚权、刘守仁、王新华、徐梦思。 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 016—2020 1 绵羊双肌表型主效基因 mstn分子检测技术 规程 1 范围 本规程规定了绵羊双肌表型主效基因 mstn的分子检测方法。 本规程适用于绵羊双肌表型主效基因 mstn的分子检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必 不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用 于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析试验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 GB/T 6682 界定的术语和定义适用于本文件。 3.1 肌肉生长抑制素 (myostatin，m