ICS 01.040.65 CCS B 04 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/ NAIA 032-2021 枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物残留量的 测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of spinetoram and its metabolites residues in wolfberry Liquid chromatography-mass spectrometry 2021-03-16发布 2021-04-01实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布TB 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏农林科学院农业资源与 环境研究所、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：牛艳、杨静、赵子丹、吴燕、王晓菁、刘霞、张锋锋、陈翔、石欣、 开建荣、杨春霞、王彩艳、张艳、王晓静、李冬、姜瑞、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 1 范围 本文件规定了枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物残留量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法 。 本文件适用于枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物的液相色谱 -质谱 /质谱法测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的 版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 乙基多杀菌素及其代谢物 spinosyn and its metabolites 乙基多杀菌素是一种新型多杀菌素类杀虫剂，有两种本体分别为 XDE-175-J 和 XDE-175-L ，有两种代谢产物，分别为 N-demethyl-XDE-175-J 和N-formyl-XDE-175-J 。 4 原理 试样用乙腈提取，用石墨化炭黑（ GCB）和N-丙基乙二胺固相萃取（ PSA）分散净化 ， 用液相色谱 -质谱 /质谱仪检测和确证，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.2 甲醇（ CH 4O）：色谱纯。 5.3 氯化钠（ NaCl）：分析纯。 5.4 N-丙基 -乙二胺吸附剂（ PSA）： 40 µm～63 µm。 5.5 石墨化炭黑（ GCB）： 120-400目。 5.6 农药标准品： N-formyl-XDE-175-J （批号 TSN105647 ）、 N-demethyl-XDE-175-J （批号 TSN030175-0002 ） 、XDE-175-J （CAS号187166-40-1 ，纯度 98.1 %） 、XDE-175-L （批号 ZZS-20-065-A8 ，纯度 95.0 %）。 全国团体标准信息平台 5.7 标准溶液配制 5.7.1 乙基多杀菌素及其代谢物标准储备溶液：分别准确称取适量的乙基多杀菌素及其代谢 物标准品 （精确至 0.01 mg），用甲醇溶解 ，分别配制成 1000 μg/mL的标准储备溶液 ， -18 ℃下保存。 5.7.2 乙基多杀菌素及其代谢物混合标准中间溶液：根据需要分别取适量乙基多杀菌素及其 代谢物的标准储备液， 用乙腈稀释成 10 μg/mL标准中间溶液， -18 ℃下保存。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱 -质谱 /质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 分析天平： 感量 0.01 g和0.00001 g。 6.3 组织捣碎机。 6.4 高速万能粉碎机： 10000 r/min。 6.5 振荡器。 6.6 离心机： 4000 r/min。 6.7 涡旋混合器。 6.8 离心管： 50 mL，塑料。 6.9 滤膜： 0.22 μm，有机相。 7 分析步骤 7.1 试样的制备 鲜、干枸杞样品于 -18 ℃冷冻冰箱中保存 。试验时将鲜 、干枸杞样品取出 ，鲜样用高速 组织捣碎机打浆 ，干样用高速万能粉碎机 （可加少量的液氮 ）粉碎（30 g样品粉碎时间为 30 s），分别置于样品瓶中， -18 ℃冷冻备用。 7.2 样品提取与净化 7.2.1 鲜果 称取枸杞鲜果 10.00 g（精确至 0.01 g）于50 mL离心管， 加入 20 mL乙腈，在水浴恒 温振荡器上震荡 40 min，加入 5.0 g氯化钠，盖上盖子 ，振摇约 1 min，放入离心机 ，4000 r/min 离心 5 min，吸取 2 mL上清液于 15 mL离心管中 （提前称好 50 mgPSA和10 mgGCB）涡旋 净化后过 0.22 μm滤膜，用液相色谱 -质谱 /质谱测定。 7.2.2 干果 称取枸杞干果 5.00 g（精确至 0.01 g）于50 mL离心管，加水 10 mL复溶 30 min，加入 20 mL乙腈，在水浴恒温振荡器上震荡 40 min，加入 5.0 g氯化钠，盖上盖子， 振摇约 1 min，放入离心机 ，4000 r/min离心 5 min，吸取 2 mL上清液于 15 mL离心管中 （提前称好 50 mgPSA和10 mgGCB）涡旋净化后过 0.22 μm滤膜，用液相色谱 -质谱 /质谱测定。 全国团体标准信息平台 7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件 a）色谱柱： Inertsil C8-3柱， 150 mm×2.1 mm（i.d）， 5.0 μm，或性能相当者。 b）柱温： 35 ℃。 c）流速： 0.4 mL/min。 d）流动相：乙腈 +水（ 90+10）。 e）进样量： 1.0μL。 7.3.2 质谱参考条件 见附录 A。 7.3.3 色谱测定与确证 根据试样中被测物的含量情况 ，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析 。标准工作 液和待测样液中农药的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件下， N-formyl-XDE-175-J 、N-demethyl-XDE-175-J 、XDE-175-J 、XDE-175-L 的保留时间分别 约为 1.74、2.84、3.39、3.69 min，多反应离子监测 色谱图参见附录 B。按照上述条件进行样 品测定，若检测样品的色谱峰保留时间与标准品一致 ，且与浓度相当标准工作溶液的相对丰 度一致， 相对丰度允许偏差不超过表 1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表1 定性确证相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% 20%至50% 10%至20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 8 结果计算和表达 用色谱数据处理或按式（ 1）计算试样中各农药的含量，计算结果需将空白值扣除。 …………………………………… （1） 式中： X —— 试样中农药的含量，单位为微克 每千克（mg/kg）； A—— 试样中农药的峰面积； V—— 试样中加入的提取溶液体积，单位为毫升（ mL）； CS —— 标准工作液中农药的浓度，单位为微克每毫升（μ g/mL）； AS—— 标准工作液中农药的峰面积； mAVCAX SS   全国团体标准信息平台 m —— 试样的质量，单位为克（ g）。 注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。 9 精密度 9.1 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分 率），应符合附录 C的要求。 9.2 在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分 率），应符合附录 D的要求。 10 定量限和回收率 10.1 定量限 本方法的定量限 XDE-175-J 为0.01 mg/kg，N-demethyl-XDE-175-J 为0.01 mg/kg， XDE-175-L 为0.01 mg/kg，N-formyl -XDE-175-J 为0.02 mg/kg。 10.2 回收率 本方法的添加浓度和回收率范围见附录 E。 全国团体标准信息平台 附录 A （资料性） 质谱分析参考条件 a）电离方式： ESI+； b）检测方式： MRM； c）电喷雾电压： 3.5kV； d）毛细管传输温度： 300 ℃； e）碰撞压力： 1.5 mTorr； f）鞘气： 30 arb； g）辅气： 10 arb。