山东科技咨询协会 　　 发 布 中 国 标 准 出 版 社 　　出 版基因测序与合成工艺技术要求 Technical requirements for gene sequencing and synthesis processes 2025 ⁃03⁃28发布 2025 ⁃04⁃03实施ICS 07.080 CCS A 40 T/SDASTC 012—2025 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SDASTC 012—2025 前言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ 引言…………………………………………………………………………………………………………… Ⅳ 1 范围………………………………………………………………………………………………………… 1 2 规范性引用文件 …………………………………………………………………………………………… 1 3 术语和定义 ………………………………………………………………………………………………… 1 4 缩略语……………………………………………………………………………………………………… 2 5 总则………………………………………………………………………………………………………… 3 6 原理………………………………………………………………………………………………………… 4 7 样本处理 …………………………………………………………………………………………………… 4 8 一代测序工艺流程 ………………………………………………………………………………………… 5 9 二代测序工艺流程 ………………………………………………………………………………………… 5 10 基因合成工艺流程 ………………………………………………………………………………………… 7 附录 A（资料性） 主要仪器设备 …………………………………………………………………………… 10 附录 B（资料性） 主要试剂及溶液 ………………………………………………………………………… 11 附录 C（资料性） 工艺流程示意图 ………………………………………………………………………… 12 附录 D（资料性） 主要实验方法 …………………………………………………………………………… 17 附录 E（资料性） 二代测序仪测序步骤 …………………………………………………………………… 19 附录 F（资料性） 寡核苷酸 （Oligo）片段合成步骤 ………………………………………………………… 20 附录 G（资料性） 引物纯化方式 …………………………………………………………………………… 21 参考文献 ……………………………………………………………………………………………………… 23目 次 Ⅰ全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/SDASTC 012—2025 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由山东科技咨询协会提出并归口 。 本文件起草单位 ：山东丽山生物科技有限公司 、丽山健康 （山东）集团有限公司 、山东长岭高科产业 发展有限公司 、山东丽山生物技术研究院有限公司 、山东丽山细胞医学发展有限公司 、槿椿康养发展 （山东） 有限公司 、山东槿椿资产运营有限公司 。 本文件主要起草人 ：高俊、房路、邱学良、祝天成、张高强、刘昊宇、孙镇、徐文强、闫纪昌、纪元、李娜、 窦梅杰、满耕孝。 Ⅲ全国团体标准信息平台 T/SDASTC 012—2025 引 言 随着基因测序与合成技术的不断发展和广泛应用 ，其逐渐丰富和渗透至医学 、健康、环境、农业等各 个领域。我国基因测序与合成产业相关支持政策集中出台 、公共卫生防控意识升级 、国民卫生支出持续 提升，市场规模有巨大的潜力和发展空间 。 目前，测序技术 、测序仪器及设备更新迭代 。制定标准化的基因测序与合成工艺流程 ，形成标准的 技术规范 ，并加以推广应用 ，有利于推动各生物企业整个乃至整个国内行业产业链的健康发展 ，提升整个 行业的技术实力 ，同时确保基因测序与合成工艺流程的质量 ，获得可靠的测序数据 ，避免信息错误和信息 丢失等情况的出现 。 Ⅳ全国团体标准信息平台 T/SDASTC 012—2025 基因测序与合成工艺技术要求 1 范围 本文件规定了基因测序与合成工艺流程的总则 、原理、样本处理 、一代测序工艺流程 、二代测序 工艺 流程、基因合成工艺流程 。 本文件适用于对基因测序与合成工艺流程的指导 。 注： 由于基因测序与合成技术并非单一技术 ，涉及不同技术领域的结合 ，包括生物 、化学、材料、机械、数据处理等 ，因 此本文件仅对常规使用一代测序 、二代测序 、基因合成的术语 、技术指标以及涉及的技术设备 、检验检测方法及常 规流程进行说明和规定 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27025 —2019　检测和校准实验室能力的通用要求 GB/T 30989 —2014　高通量基因测序技术规程 GB/T 37873 —2019　合成基因质量评价通则 GB/T 43636 —2024　法庭科学　 DNA二代测序检验规范 3 术语和定义 GB/T 30989 —2014、GB/T 43636 —2024、GB/T 37873 —2019界定的以及下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 细胞裂解 cell lysis 将细胞的结构破裂以释放其内部成分的过程 。 3.2 引物 primer 在DNA复制过程中 ，结合于模板链上并作为复制延伸的起始位点和 /或终止位点的 ，具有一定长度 和顺序的寡聚核苷酸 。 ［来源：GB/T 30989 —2014，3.11］ 3.3 酶切 enzyme cutting 用特定的限制性内切酶对 DNA分子或载体分子在特定的位置进行切割 ，以获得特定的粘 /平末端 用于后续的连接反应 。 3.4 桥式 PCR bridge polymerase chain reaction 单链文库 DNA一端序列与芯片表面固定的寡聚核苷酸特异性结合 ，当连接片段的另一端弯曲 ，与 1全国团体标准信息平台 T/SDASTC 012—2025 芯片表面固定的另一条互补寡聚核苷酸 “形成桥” ，以文库 DNA为模板进行扩增的反应 。 ［来源：GB/T 43636 —2024，3.1.4］ 3.5 二代测序 next⁃generation sequencing 区别于传统一代测序 ，能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术 ，通常一次测序反应 能产出不低于 100 Mb的测序数据 。 ［来源：GB/T 30989 —2014，3.19，有修改］ 3.6 接头 adapter 用于标记和固定待测序片段的一小段已知序列的 DNA片段。 3.7 基因测序 gene sequencing 对核酸分子的核苷酸排列顺序的测定 ，即测定组成核酸分子的腺嘌呤 （A） 、鸟嘌呤（G） 、胞嘧啶（C） 和胸腺嘧啶 （T）或者是尿嘧啶 （U）的排列顺序 。 ［来源：GB/T 30989 —2014，3.18］ 3.8 基因 gene 位于染色体上编码一个特定功能产物 （如蛋白质或 RNA分子）的一段核苷酸序列 ，是遗传信息的基 本单位。 ［来源：GB/T 30989 —2014，3.1］ 3.9 合成基因 synthesized gene 用生物化学的方法 ，按照设定的核苷酸序列人工合成的双链 DNA。 ［来源：GB/T 37873 —2019，3.1］ 3.10 文库 library 通过生物来源的 、人工合成的或克隆技术所得到的一个重建分子群 。 注： 例如基因组文库 、互补 DNA文库、噬菌体展示肽文库等 。 ［来源：GB/T 30989 —2014，3.5，有修改］ 3.11 寡聚核苷酸 oligonucleotide 一类短链核苷酸的总称 ，常用作探针确定 DNA或RNA的序列。 ［来源：GB/T 30989 —2014，3.4］ 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 COA　分析报告 （Certificate of Analysis ） CPG　可控微孔玻璃 （Controlled Pore Glass ） DNA　脱氧核糖核酸 （Deoxyribonucleic Acid ） DNase　脱氧核糖核酸酶 （Deoxyribonuclease ） DSL　脱盐（Desalination ） ddNTP　双脱氧核糖三磷酸 （Double Deoxy‑ribonucleoside Triphosphate ） 2全国团体标准信息平台