4ICS 67.050 CCS X 04 河 北 省 检 验 检 疫 学 会 团 体 标 准 T/HBIQA SN T/HBIQA 0003 —2025 动物源性食品中 52种β-内酰胺类药物 残留量的测定 液相色谱 -串联质谱 法 Determination of 52 β-Lactam residues in animal derived foods Liquid chromatography -tandem mass spectrometry 2026-01-01实施 2025-11-13发布 河北省检验检疫学会 发布 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0003 —2025 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由河北省检验检疫学会提出并归口。 本文件起草单位：石家庄市疾病预防控制中心 、河北医科大学。 本文件主要起草人：王可 、李璐、赵伟、连靠奇、李思思、强春钰、 马玲、郭爱静、邢骞文、夏翠 。 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0003 —2025 1 动物源性食品中 52种β -内酰胺类药物残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件规定了 动物源性食品中 52种β-内酰胺类药物残留量检测的制样和液相色谱 -串联质谱测定 方法。 本文件适用于鸡肉、鸡蛋、牛奶和鱼肉及其制品中比阿培南、头孢替安、阿莫西林、头孢吡肟、多 尼培南、头孢唑兰、头孢布烯、阿扑西林、头孢匹林、头孢他啶、美罗培南、头孢地尼、氨苄西林、头 孢氨苄、头孢匹罗、头孢唑肟、头孢拉定、西司他丁、头孢他美、头孢克肟、美西林、头孢噻肟、头孢 特仑新戊酯、头孢曲松、法罗培南、头孢甲肟 、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢唑啉、头孢硫脒、头孢地嗪、 替卡西林、头孢匹胺、头孢孟多钠、羧苄西林、头孢哌酮、头孢噻呋、青霉素 G、甲氧西林、头孢呋辛 酯、阿洛西林、头孢泊肟酯、哌拉西林、美洛西林、头孢他美酯、双氯西林、氟氯西林、氯唑西林、苯 唑西林、萘夫西林、青霉素 Ⅴ、头孢羟氨苄 52种β-内酰胺类药物残留量的测定，其它动物源性食品经 验证后可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的 β-内酰胺类药物 用乙腈 -水溶液提取，提取液经分散固相萃取 净化， 氮吹浓缩后用乙腈 -0.1% 甲酸水溶液复溶，液相色谱 -串联质谱 测定，基质外标法定量 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.1 乙腈（CH 3CN）：色谱纯。 5.1.2 甲酸（CH 2O2）：色谱纯。 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0003 —2025 2 5.2 溶液配制 5.2.1 0.1%甲酸水溶液：取 1.0 mL甲酸，用水定容至 1 000 mL，混匀。 5.2.2 0.1%甲酸水 -乙腈溶液（1:1, v/v）：取 50 mL 0.1% 甲酸水溶液（ 5.2.1），加入 50 mL乙腈，混 匀。 5.2.3 乙腈 -0.1%甲酸水溶液（ 1:9, v/v）：取 10 mL乙腈和90 mL 0.1% 甲酸水溶液（5.2.1），混匀。 5.2.4 乙腈 -水溶液（2:1, v/v）：取 25 mL水和50 mL乙腈，混匀 。 5.2.5 乙腈 -水溶液（3:1, v/v）：取 25 mL水和75 mL乙腈，混匀 。 5.3 标准品 比阿培南、头孢替安、阿莫西林、头孢吡肟、多尼培南、头孢唑兰、头孢布烯、阿扑西林、头孢 匹 林、头孢他啶、美罗培南、头孢地尼、氨苄西林、头孢氨苄、头孢匹罗、头孢唑肟、头孢拉定、西司他 丁、头孢他美、头孢克肟、美西林、头孢噻肟、头孢特仑新戊酯、头孢曲松、法罗培南、头孢甲肟、头 孢丙烯、头孢呋辛、头孢唑啉、头孢硫脒、头孢地嗪、替卡西林、头孢匹胺、头孢孟多钠、羧苄西林、 头孢哌酮、头孢噻呋、青霉素 G、甲氧西林、头孢呋辛酯、阿洛西林、头孢泊肟酯、哌拉西林、美洛西 林、头孢他美酯、双氯西林、氟氯西林、氯唑西林、苯唑西林、萘夫西林、青霉素Ⅴ、头孢羟氨苄 52 种β-内酰胺类药物，纯度均≥ 92.2%，具体信息见 附录 A表A.1。 5.4 标准溶液的配制 5.4.1 单一标准储备液（ 100 μg/mL）：分别称取 52种β-内酰胺类药物标准品（ 5.3）10 mg（精确至 0.1 mg）于100 mL棕色容量瓶中，用乙腈 -水溶液（5.2.4）溶解并定容至刻度， -18 ℃避光保存 。 5.4.2 混合标准中间液（ 1 µ g/mL）：分别准确吸取标准中间液（ 5.4.1）各 0.10 mL，置于10 mL棕色 容量瓶中，用乙腈 -水溶液（5.2.4）稀释至刻度， 现用现配 。 5.4.3 基质空白溶液 ：将不同基质的阴性空白样品分别按照 8.1和8.2净化处理后得到的溶液。 5.4.4 基质标准工作液：准确量取适量混合标准中间液（ 5.4.2），用基质空白溶液（ 5.4.3）稀释，配 制成浓度分别为 0.5 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L和100 μg/L 的系列基质标准工作 液，现用现配。 5.5 材料 5.5.1 十八烷基甲硅烷改性硅胶 （C18）：40 µm~60 µm 。 5.5.2 微孔尼龙滤膜： 0.22 µ m。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 离心机：转速不低于 10 000 r/min 。 6.3 超声波清洗器。 6.4 涡旋振动器。 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0003 —2025 3 6.5 氮吹仪。 6.6 天平：感 量为 0.01 g和0.000 0 1 g。 7 试样的制备与保存 7.1 试样的制备 样品经粉碎、均质后置入样品瓶中，密封，并做上标记。 7.2 试样的保存 -18 ℃下保存。 8 分析步骤 8.1 提取 称取 1.00 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL离心管中，加入 12 mL乙腈 -水溶液（ 5.2.5），2 000 r/min 涡旋振荡 3 min，在 4 ℃下以 10 000 r /min离心 5 min，转移上清 液9 mL至15 mL离心管中，待净化。 8.2 净化 将0.3 g C 18（5.5.1）加入到含有 9 mL上清液的 15 mL离心管中， 涡旋 1 min，于4 ℃下10 000 r/min 离心 5 min，移取6 mL上清液至另一离心管中， 于40 ℃下氮吹至近干，加入 1 mL乙腈 -0.1%甲酸水溶 液（5.2.3）复溶， 经0.22 μm尼龙滤膜过滤，供液相色谱 -串联质谱测定。 8.3 液相色谱 -串联质谱参考条件 8.3.1 参考色谱条件 a) 色谱柱： C18柱（150 mm×2.1 mm ，3.5 µm）或相当者； b) 流动相： A为0.4%甲酸水溶液 ，B为乙腈，梯度洗脱条件见表 1； c) 流速：0.5 mL/min； d) 柱温： 40 ℃； e) 进样量： 5 µL。 表1 梯度洗脱条件 时间（min） A（%） B（%） 0.0 96 4 3.5 96 4 3.6 95 5 7.5 95 5 7.6 92 8 10.5 92 8 10.6 88 12 12.5 88 12 12.6 84 16 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0003 —2025 4 14.5 84 16 14.6 82 18 20.5 82 18 20.6 20 80 21.5 20 80 21.6 96 4 24.0 96 4 8.3.2 参考质谱条件 a) 离子化方式：电喷雾正离子 模式（ ESI+）； b) 质谱扫描方式：多反应监测（ MRM）； c) 其他参考质谱条件见附录 A中的表 A.1。 8.4 液相色谱 -串联质谱测定 8.4.1 定性测定 在相同测试条件下， 试样溶液中 β-内酰胺类 药物与基质标准溶液中 β-内酰胺类 药物的保留时间偏差 在± 0.1 min之内；且检测到的相对离子丰度，应与浓度相当的 基质标准溶液相对离子丰度一致 ，其允许 偏差为 ± 40%。 8.4.2 定量测定 按8.3.1和8.3.2设定仪器条件，取 试样溶液和相应的基质标准溶液 ，作单点或多点校正，外标法定 量。试样溶液中 待测物的响应值应在标准曲线线性范围内；超出线性范围时，可用 基质空白溶液 稀释后 重新进样测定。 在上述色谱 -质谱条件下， 基质标准溶液 中52种β-内酰胺类 药物的特征离子 质量色谱图 见附录 B。 8.4.3 空白实验 取空白试样，除不加标准溶液外，采用与试样相同的