ICS 67.050 CCS X 04 河 北 省 检 验 检 疫 学 会 团 体 标 准 T/HBIQA SN T/HBIQA 0002 —2025 蜂蜜中28种大环内酯类和林可酰胺类药 物残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of 28 macrolides and lincosamides in honey Liquid chromatography -tandem mass spectrometry 2026-01-01实施 2025-11-13发布 河北省检验检疫学会 发布 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0002 —2025 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由河北省检验检疫学会提出并归口。 本文件起草单位：石家庄市疾病预防控制中心 、河北医科大学。 本文件主要起草人：郭爱静 、田会方、赵伟、 王宁、王可、连靠奇、高沛雨、吕蔚、杨洁 。 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0002 —2025 1 蜂蜜中28种大环内酯类 和林可酰胺类 药物残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件规定了蜂蜜中 28种大环内酯类 和林可酰胺类 药物残留量 检测的制样和液相色谱 -串联质谱 测 定方法。 本文件适用于蜂蜜中林可霉素、新螺旋霉素 Ⅰ、9S-红霉胺、克林霉素、螺旋霉素、阿奇霉素 A、阿 奇霉素、竹桃霉素、替米考星、 红霉素、泰乐 菌素、维吉 尼亚霉素 M1、脱水红霉素 A、克拉霉素、吉 他霉素、罗红霉素、红霉素 A烯醇醚、麦迪霉素、醋竹桃霉素、交沙霉素、泰万菌素、依普菌素、阿维 菌素、多拉菌素、伊维菌素、塞拉菌素、埃玛菌素 、莫西菌素 28种大环内酯类 和林可酰胺类 药物残留量 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的 28种大环内酯类 和林可酰胺类 药物用乙腈提取， 提取液经分散固相萃取 净化，氮吹浓缩 后用乙腈 -0.1%甲酸水溶液复溶，液相色谱 -串联质谱 测定，基质外标法定量。 5 试剂和材料 5.1 试剂 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.1 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.1.2 甲醇（ CH 4O）：色谱纯。 5.1.3 甲酸（CH 2O2）：色谱纯。 5.2 溶液配制 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0002 —2025 2 5.2.1 0.1%甲酸水溶液：取 50 μL 甲酸，用水定容至 50 mL，混匀。 5.2.2 乙腈 -0.1%甲酸水溶液（ 28:72, v/v ）：取 36 mL 0.1%甲酸水溶液（ 5.2.1），加入 14 mL乙腈， 混匀。 5.3 标准品 林可霉素、新螺旋霉素 Ⅰ、9S-红霉胺、克林霉素、螺旋霉素、阿奇霉素 A、阿奇霉素、竹桃霉素、 替米考星、红霉素、泰乐 菌素、维吉尼亚霉素 M1、脱水红霉素 A、克拉霉素、吉 他霉素、罗红霉素、 红霉素 A烯醇醚、麦迪霉素、醋竹桃霉素、交沙霉素、泰万菌素、依普菌素、阿维菌素、多拉菌素、 伊维菌素、塞拉菌素、埃玛菌素 、莫西菌素 28 种大环内酯类 和林可酰胺类 药物，纯度均≥94.1%，具 体信息见附录 A表A.1。 5.4 标准溶液的配制 5.4.1 单一标准储备液 （100 μg/mL ）：分别称取 28种大环内酯类 和林可酰胺类 药物标准品（ 5.3）10 mg（精确至 0.1 mg）于 100 mL容量瓶中，用甲醇溶解 并定容至刻度， -18 ℃避光保存。 5.4.2 混合标准中间液 （1.0 μg/mL ）：准确吸取 标准中间液 （5.4.1）各 0.10 mL于10 mL容量瓶中， 用甲醇定容至刻度 ，2 ℃~8 ℃ 避光保存。 5.4.3 基质空白溶液 ：将蜂蜜阴性空白样品按照 8.1和8.2净化处理后得到的溶液。 5.4.4 基质标准工作液：准确量取 混合标准中间液（ 5.4.2），用基质空白溶液 （5.4.3）稀释，配制成 浓度分别为 0.5 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L 和200 μg/L的系列基质标 准工作液，现用现配 。 5.5 材料 5.5.1 十八烷基甲硅烷改性硅胶（ C18）： 40 µ m~60 µ m 。 5.5.2 微孔尼龙滤膜： 0.22 µm。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 离心机：转速不低于 8 000 r/min 。 6.3 氮吹仪。 6.4 超声波清洗器。 6.5 涡旋振动器。 6.6 天平：感量为 0.01 g和0.000 0 1 g。 7 试样的制备与 保存 7.1 试样的制备 蜂蜜样品搅拌均匀后置入样品瓶中，密封，并做上标记。 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0002 —2025 3 7.2 试样的保存 4 ℃避光保存 。 8 分析步骤 8.1 提取 称取 1.00 g（精确至 0.01 g）蜂蜜试样于50 mL 离心管中，加入 1 mL水，涡旋混匀，再加入 12 mL 乙腈，以 2 000 r/min 涡旋振荡 2 min，于4 ℃下8 000 r/min 离心 5 min，将上清液移出， 待净化。 8.2 净化 取9 mL上清液于盛 有0.3 g C18（5.5.1）的15 mL离心管中， 涡旋 1 min，以 8 000 r/min 离心 5 min， 移取6 mL上清液至另一离心管中，于 40 ℃下氮吹至近干，加入 1 mL乙腈 -0.1%甲酸水溶液（5.2.2） 复溶，经0.22 μm尼龙滤膜过滤，供液相色谱 -串联质谱测定。 8.3 液相色谱 -串联质谱参考条件 8.3.1 参考色谱条件 a) 色谱柱： 五氟苯基 柱（100 mm× 3.0 mm ，2.6 μm）或相当者； b) 流动相： A为0.1%甲酸水溶液 ，B为乙腈，梯度洗脱条件见表 1； c) 流速：0.3 mL/min； c) 柱温： 40 ℃； d) 进样量： 3 µ L。 表1 梯度洗脱条件 时间（min） A（%） B（%） 0 72 28 0.5 72 28 0.6 68 32 4.0 68 32 4.1 65 35 5.0 65 35 5.1 55 45 9.0 55 45 9.1 25 75 12.0 25 75 12.1 72 28 16.0 72 28 8.3.2 参考质谱条件 a) 离子化方式：电喷雾正离子 模式（ ESI+）； b) 质谱扫描方式：多反应监测（ MRM）； c) 其他参考质谱条件见附录 A中的表 A.1。 全国团体标准信息平台 T/HBIQA 0002 —2025 4 8.4 液相色谱 -串联质谱测定 8.4.1 定性测定 在相同测试条件下， 试样溶液中 大环内酯类 和林可酰胺类 药物与基质标准溶液中 大环内酯类 和林可 酰胺类药物的保留时间偏差在 ± 0.1 min之内；且检测到的相对离子丰度，应与浓度相当的 基质标准溶液 相对离子丰度一致 ，其允许偏差为 ± 40%。 8.4.2 定量测定 按8.3.1和8.3.2设定仪器条件， 取试样溶液和相应的基质标准溶液，作单点或多点校正，外标法定 量。试样溶液中 待测物的响应值应在标准曲线线性范围内；超出线性范围时，可用 基质空白溶液 稀释后 重新进样测定。 在上述色谱 -质谱条件下， 基质标准溶液 中28种大环内酯类和林可酰胺类药物的 特征离 子质量色谱图见附录 B。 8.4.3 空白实验 取空白试样，除不加标准溶液外，采用与试样相同的测定步骤进行平行操作。 9 结果计算 试样中大环内酯类和林可酰胺类 药物的残留量按标准曲线或公式（ 1）计算： X=A×Cs×V1×1000 As×V2×m×1000 ………………………… .........（1） 式中： X——试样中被测物残留量的数值，单位为微克每千克（ μg/kg）； A——试样溶液中被测物的峰面积； Cs——标准溶液中被测物浓度的数值，单位为纳克每毫升（ ng/mL）； V1——提取液总体积的数值，单位为毫升（ mL）； As——标准溶液中被测物的峰面积； V2——用于氮吹的上清液体积，单位为毫升（ mL）； m——试样质量的数值，单位为克（ g）。 10 检测方法的灵敏度、准确度和精密度 10.1 灵敏度 本方法对蜂蜜中 28种大环内酯类 和林可酰胺类 药物的检出限为 0.5 µ g/kg ，定量限为 1.5 µ g/kg。 10.2 准确度 本方法对蜂蜜中 28种大环内酯