T/GDAAV 0611—2025 ICS 65.020.30 CCS B 43 团体标 准 鹦鹉热衣原体超快速荧光 PCR检测 技术规范 Technical Specification for Ultra -fast Real-time PCR Detection of Chlamydia Psittaci 2025-09-26发布 2025-10-01实施 广东省畜牧兽医学会 发 布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GDAA V 0611—2025 I 目 次 前言 ................................ ................................ .................. II 1 范围 ................................ ................................ ................. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ....... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........... 1 3.1 超快速荧光 PCR ................................ ................................ ... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............... 1 5 试剂和耗材 ................................ ................................ ........... 1 5.1 试剂 ................................ ................................ ............. 2 5.2 引物和探针 ................................ ................................ ....... 2 6 仪器设备 ................................ ................................ ............. 2 7 样品采集与处理 ................................ ................................ ....... 2 7.1 生物安全措施 ................................ ................................ ..... 2 7.2 样品采集 ................................ ................................ ......... 2 7.3 样品前处理 ................................ ................................ ....... 3 8 操作方法 ................................ ................................ ............. 3 8.1 样品核酸提取 ................................ ................................ ..... 3 8.2 反应体系的配制 ................................ ................................ ... 3 8.3 超快速荧光 PCR反应 ................................ ............................... 4 9 质控标准与结果判定 ................................ ................................ ... 4 9.1 阈值设定 ................................ ................................ ......... 4 9.2 质控标准 ................................ ................................ ......... 4 9.3 结果判定 ................................ ................................ ......... 4 附录A 溶液配制 ................................ ................................ ......... 5 附录B pUC57-OmpA重组质粒和内参的制备 ................................ .................. 6 附录C 鹦鹉热衣原体和内参引物、探针的名称、序列 ................................ ......... 8 附录D DNA提取方法（磁珠法） ................................ .......................... 9 全国团体标准信息平台 T/GDAA V 0611 —2025 Ⅱ 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由东莞市动物疫病预防控制中心、广东省畜牧兽医学会提出。 本文件由广东省畜牧兽医学会归口。 主要起草单位：东莞市动物疫病预防控制中心、广东省动物疫病预防控制中心、超快生物技术（广 州）有限公司、广东省疾病预防控制中心、广州市疾病预防控制中心、广东省农业科学院动物卫生研究 所、深圳市动植物疫病预防控制中心、珠海市动物疫病预防控制中心、海南省疾病预防控制中心、广州 国家实验室、东莞市洪梅镇农业技术服务中心、东莞市东坑镇农业技术服务中心。 主要起草人：张险朋、叶 健、刘雪怡、管知深、李柏生、吴新伟、曹 蓝、柯艳坤、曾 平、徐振 娜、洪伟彬、陈 晶、李丹丹、李小军、张远龙、卢受昇、徐 强、吴智民、赖笑娴、 曾瀚熙、王晓虎、 韩 霄、林仰孝、卢伟昌、李 敏、谢柱彬、钟群芳、谭铭光、林梦哲 。 全国团体标准信息平台 T/GDAA V 0611 —2025 1 鹦鹉热衣原体超快速荧光 PCR检测技术规范 1 范围 本文件描述了鹦鹉热衣原体超快速荧光 PCR检测方法。 本文件适用于哺乳动物、禽类和环境样品中鹦鹉热衣原体的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过本文件的规范性引用而成为本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 超快速荧光 PCR ultra-fast Real -time PCR 一种基于快速温控模块技术（升降温速率 40 ℃/s以上），结合快速启动酶及高特异性预混反应体系 所构建的高效核酸扩增检测方法，可在 8min ~15 min内完成 45个循环反应 。 4 缩略语 下列缩略语适合本文件。 PCR：聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ） Ct值：阈值循环数（ Cycle threshold ） DNA：脱氧核糖核酸（ Deoxyribonucleic Acid ） F：上游引物（ Forward primer ） R：下游引物（ Reverse primer ） P：探针（ Probe） BHQ2：黑洞淬灭剂 2（Black Hole Quencher 2 ） FAM：6-羧基荧光素（ 6-Carboxyfluorescein ） MGB：Minor Groove Binder Quencher 淬灭基团 Cy5：近红外荧光染料（ Near -infrared fluorescent dyes 5 ） PBS：磷酸盐缓冲液（