T/GDAAV 0511—2025 ICS 65.020.30 CCS B 43 团体标 准 非洲猪瘟病毒超快速荧光 PCR检测 技术规范 Technical Specification for Ultra -fast Real-time PCR Detection of African Swine Fever Virus 2025-09-26发布 2025-10-01实施 广东省畜牧兽医学会 发 布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GDAA V 0511 —2025 I 目 次 前言 ................................ ................................ .................. Ⅱ 1 范围 ................................ ................................ ................. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ....... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........... 1 3.1 超快速荧光 PCR ................................ ................................ ... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............... 1 5 试剂和耗材 ................................ ................................ ........... 2 5.1 试剂 ................................ ................................ ............ 2 5.2 引物和探针 ................................ ................................ ...... 2 6 仪器设备 ................................ ................................ ............. 2 7 样品采集与处理 ................................ ................................ ....... 2 7.1 生物安全措施 ................................ ................................ ..... 2 7.2 采样工具 ................................ ................................ ........ 2 7.3 样品采集 ................................ ................................ ........ 2 7.4 样品运输 ................................ ................................ ........ 3 7.5 样品前处理 ................................ ................................ ...... 3 8 操作方法 ................................ ................................ ............. 3 8.1 样品核酸提取 ................................ ................................ .... 3 8.2 反应体系的配制 ................................ ................................ .. 3 8.3 超快荧光 PCR反应 ................................ ................................ 4 9 质量控制与 结果判定 ................................ ................................ ... 4 9.1 阈值设定 ................................ ................................ ........ 5 9.2 质控标准 ................................ ................................ ........ 5 9.3 结果描述及判定 ................................ ................................ .. 5 附录A（规范性） 溶液配制 ................................ ............................... 6 附录B（资料性） 非洲猪瘟病毒 pUC57-B646L重组质粒和内参的制备 ........................... 7 附录C（规范性） 非洲猪瘟病毒和内参引物、探针的名称、序列 ............................... 9 附录D（资料性） DNA提取方法（磁珠法 ） ................................ ................ 10 全国团体标准信息平台 T/GDAA V 0511 —2025 Ⅱ 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由东莞市动物疫病预防控制中心、广东省畜牧兽医学会提出。 本文件由广东省畜牧兽医学会归口。 主要起草单位： 东莞市动物疫病预防控制中心、 超快生物技术 （广州） 有限公司、 广州国家实验室、 广东省动物疫病预防控制中心、深圳市动植物疫病预防控制中心、深圳海关动植物检验检疫技术中心、 珠海市动物疫病预防控制中心、 海南省动物疫病预防控制中心、 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、 广州市疾病预防控制中心、肇庆市动物疫病预防控制中心、东莞市横沥镇农业技术服务中心、东莞市东 坑镇农业技术服务中心、华润五丰肉类食品（河南）有限公司深圳分公司、东莞市洪梅镇农业技术服务 中心、东莞鹏佑生物科技有限公司 。 主要起草人：张险朋 、管知深、卢受昇、徐 强、徐振娜、李秋剑、阮周曦、黄 铮、迟庆安、韦正 吉、刘雪怡、李漪舟、邝筱珊、曹 蓝、周美芳、赖笑娴、周柱辉、卢伟昌、谢柱彬、洪伟彬、王婉君、 林仰孝、李小军、张远龙、李 敏、叶毅飞、 曾瀚熙、 钟群芳、谭铭光、林梦哲 、黄超杰 。 全国团体标准信息平台 T/GDAA V 0511 —2025 1 非洲猪瘟病毒超快速荧光 PCR检测技术规范 1 范围 本文件描述了非洲猪瘟病毒超快速荧光 PCR检测方法。 本文件适用于猪 组织样品 、猪全血、动物产品和环境样品中非洲猪瘟病毒的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过本文件的规范性引用而成为本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 超快速荧光 PCR ultra-fast Real -time PCR 一种基于快速温控模块技术（升降温速率 40℃/s以上），结合快速启动酶及高特异性预混反应体系 所构建的高效核酸扩增检测方法，可在 8min~15min 内完成 45个循环反应 。 4 缩略语 下列缩略语适合本文件。 PCR：聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ） Ct值：阈值循环数（ Cycle threshold ） DNA：脱氧核糖核酸（ Deoxyribonucleic Acid