ICS 67.120 CCS C 135 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0395—2025 畜禽肉中 9种生物胺含量的测定 液相色谱法 Determination of Nine Biogenic Amines in Livestock and Poultry Meat by HPLC 2025-07- 07发布 2025-07- 30实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0395—2025 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全） ）、宁夏回族自治区畜牧工作站、宁夏回族自治区兽药饲料研究所、宁夏化学 分析测试协会。 本文件主要起草人 ：张瑶、郭阳、王泽岚、蒋秋斐、王鹏、卜宁霞、艾琦、刘迎、李强、顾亚 荣、吴明、吕毅、马桂娟、张小飞。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0395—2025 1畜禽肉中 9种生物胺的测定 液相色谱法 1范围 本文件规定了 畜禽肉中 9种生物胺 （色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、精 胺、亚精胺）的液相色谱检测方法。 本文件适用 畜禽肉中 9种生物胺 （色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、精胺、 亚精胺）的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样用5%三氯乙酸提取，正己烷除脂，经丹磺酰氯衍生，反相色谱柱分离，供液相色谱仪测 定，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1盐酸：优级纯。 5.1.2丙酮：优级纯。 5.1.3丹磺酰氯（ Dans-Cl）：优级纯。 5.1.4碳酸氢钠：优级纯。 5.1.5氨水：优级纯。 5.1.6三氯乙酸：优级纯。 5.1.7甲醇：色谱纯。 5.1.8正己烷：色谱纯。 5.1.9 0.1mol/L盐酸溶液：取盐酸（ 5.1.1）0.83mL，用水稀释 定容到 100mL，混匀。 5.1.10 5g/L Dans-Cl衍生溶液：准确称取丹磺酰氯（ 5.1.3）0.5g，以丙酮（ 5.1.2）为溶剂， 定容至 100mL，混匀， 置4℃冰箱避光保存。 5.1.11 20g/L碳酸氢钠溶液： 准确称取 2.0g碳酸氢钠（ 5.1.4），加水溶解并定容至 100mL，混匀。 5.1.12 5%三氯乙酸： 称取 25g三氯乙酸（ 5.1.6），用适量水完全溶解后转移至 500mL容量瓶中 ， 定容至刻度。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0395—2025 2 5.2标准品 9种生物胺标准品名称、化学分子式、 CAS号和纯度见附录 A。 5.3标准溶液配制 5.3.1标准储备液（ 10.0mg/mL ）：分别准确称取 9种生物胺标准物质适量，用 0.1mol/L盐酸溶液 （5.1.9）溶解并定容至 10mL，避光冷藏贮存，保存期限为 3个月。 5.3.2混合标准中间液（ 1.0mg/mL ）：分别移取 9种生物胺标准储备液 1.0mL，用 0.1mol/L盐酸溶液 定容至 10mL，避光冷藏贮存，保存期限为 1个月。 5.3.3混合标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准中间液，用 0.1mol/L盐酸溶液定容至 10.0mL，配制成浓度为 1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L 、20.0mg/L 、50.0mg/L 、100.0mg/L 、 200.0mg/L 的标准工作溶液，临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 6.2天平：感量 0.01m g和0.01g。 6.3均质机。 6.4涡旋混合器。 6.5高速离心机： 最大转速 9000r/min 。 6.6水浴装置。 6.7滤膜针头滤器， 孔径 0.22μm，或相当者。 7分析步骤 7.1试样制备 取适量新鲜或冷冻的供试组织绞碎，充分均质，装入洁净容器，密封， -18℃以下保存。 7.2提取与净化 7.2.1提取 称取 5g样品（精确到 0.01g）于50mL具塞离心管中， 加入 5%三氯乙酸（ 5.1.12）20mL，涡旋 振荡提取 30min，8000r/min 离心 10min，转移上清液至 50mL容量瓶中， 残渣用 5%三氯乙酸 （5.1.12）溶液再提取一次，合并上清液， 用5%三氯乙酸（ 5.1.12）稀释至刻度，待净化。 7.2.2净化 移取上述试样提取液 10.0mL，置25mL具塞试管中， 加入 10mL正己烷（ 5.1.8），涡旋振荡 5min，弃去上层有机相， 重复进行 2次。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0395—2025 37.2.3衍生 7.2.3.1试样的衍生： 取1.0mL上述净化液，加入具塞试管中， 依次加入 20g/L碳酸氢钠溶液 （5.1.11）0.3mL、5g/L Dans-Cl丙酮溶液（ 5.1.10）0.5mL，涡旋混匀， 于60℃水浴避光孵育 20min 取出，加入 0.1mL浓氨水（ 5.1.5），继续加热 10min，去除多余衍生剂，用乙腈定容 至2.5mL，混 匀，过0.22μ m滤膜（ 6.7），滤液 供HPLC分析。 7.2.3.2标液的衍生： 分别移取 1.0mL生物胺标准系列溶液， 置于 10mL具塞试管中，以下操作同 试样的衍生步骤。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18，2.1mm×150mm ，粒径 3.5μm或性能相当。 b）紫外检测波长： 254nm。 c）柱温： 35℃。 d）流动相： A：水， B：甲醇（5.1.7）；梯度洗脱见表 1。 e）流速： 0.8mL/min 。 f）进样量： 5μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.8 45 55 18 0.8 25 75 25 0.8 20 80 35 0.8 10 90 38 0.8 25 75 40 0.8 45 55 7.4标准曲线的制作 将5μL系列混合标准工作液的衍生液分别注入高效液相色谱仪 ，测得目标化合物的峰面积 ，以 系列混合标准工作液的浓度为横坐标 ，以目标化合物的峰面积为纵坐标 ，绘制标准曲线 。标准溶液 色谱图见附录 B。 7.5试样溶液的测定 将试样的衍生溶液注入高效液相色谱仪中 ，测得峰面积 ，以保留时间定性 。根据标准曲线得到 待测液中各目标化合物的浓度。 8结果与表达 试样中生物胺含量按式（ 1）进行计算： )1(10001000   fmV CX 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0395—2025 4式中： X ──试样中各种化合物含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； c ──由标准曲线计算出的试样溶液浓度，单位为毫克每升（ mg/L）； V ──试样溶液的体积，单位为毫升（ mL）； m ──试样质量，单位为克（ g）； f ──稀释倍数。 注：测定结果用平行测定的算术平均值表示 ，保留三位有效数字 。计算结果保留三位有效数字 。 9精密度 在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20%。 10定量限 色胺、 β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、精胺和亚精胺定量限 均为 50mg/kg。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0395—2025 5 附录 A (资料性） 9种生物胺标准品名称、化学分