中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5286 —2021 进出口纺织品 富马酸二甲酯的测定 表面等离子体共振法 Textiles for import and export —Determination of dimethylfumarate (DMF) — Surface plasmon resonance (SPR) method 2021 -11-22发布 2022 -06-01 实施ICS 59.080.01 W 04 中华人民共和国海关总署 发 布SN/T 5286—2021前 言 本标准按照 GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本标准由中国人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海海关。 本标准主要起草人：刘芳、黄钰、刘敏华、魏孟媛、陈翔。 I1 SN/T 5286—2021进出口纺织品 富马酸二甲酯的测定 表面等离子体共振法 1 范围 本标准规定了进出口纺织品中富马酸二甲酯含量的表面等离子体共振测定方法。 本标准适用于进出口纺织品中富马酸二甲酯含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 3 原理 以乙酸乙酯为溶剂，超声提取纺织品中的富马酸二甲酯（DMF） ，提取液经浓缩后用乙酸乙酯定 容、缓冲液稀释后，用表面等离子体共振仪进行测定。 传感芯片表面修饰富马酸二甲酯牛血清偶联蛋白（DMF -BSA） 。提取液和富马酸二甲酯单克隆抗 体 （DMF -6C6） 的混合液流过芯片，保持抗体的浓度不变，通过 SPR 检测仪检测混合液中的游离抗体， 从而间接测定待测试样中 DMF 含量。 4 试剂 除非另有说明，仅使用分析纯的试剂和符合 GB/T 6682 规定的三级水或相当纯度的水。 4.1 乙酸乙酯：色谱纯。 4.2 氢氧化钠：1 mol/L。 4.3 盐酸：0.2 mol/L。 4.4 氯化钠：分析纯。 4.5 磷酸氢二钠：分析纯。 4.6 磷酸二氢钠：分析纯。 4.7 醋酸钠溶液：0.2 mol/L。 4.8 醋酸溶液：0.2 mol/L。 4.9 甘氨酸溶液：0.2 mol/L。 4.10 2 -吗啉乙磺酸（MES） ：分析纯。 4.11 1 -（3 -二甲氨基丙基） -3-乙基碳二亚胺盐（EDC） ：分析纯。 4.12 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS） ：分析纯。 4.13 富马酸二甲酯（DMF） ：CAS 号 624 -49-7，纯度≥ 99%。 4.14 富马酸二甲酯 -牛血清白蛋白（DMF -BSA） ：电泳级。 4.15 富马酸二甲酯单克隆抗体（DMF -6C6） ：IC 50=0.1。2 SN/T 5286—20214.16 牛血清白蛋白（BSA） ：电泳级。 4.17 MES 溶液：参见 A.1。 4.18 0.2 mol/L EDC 溶液：参见 A.2。 4.19 0.1 mol/L NHS 溶液：参见 A.3。 4.20 0.2 mol/L 醋酸盐缓冲液 : 参见 A.4。 4.21 0.2 mol/L 磷酸盐（PBS）缓冲液：参见 A.5。 4.22 DMF -BSA 溶液：参见 A.6。 4.23 DMF -6C6 溶液：参见 A.7。 4.24 DMF/ DMF -6C6 标准溶液：参见 A.8。 4.25 0.1%（质量比）BSA 水溶液。 4.26 甘氨酸 -盐酸溶液：参见 A.9。 4.27 灭菌水：纯水经 121 ℃高压灭菌 30 min 制成。 5 仪器和设备 5.1 分析天平：感量分别为 0.000 1 g 和 0.01 g。 5.2 超声波发生器：工作频率 40 kHz。 5.3 旋转蒸发仪器。 5.4 聚四氟乙烯滤膜（PTFE） ：0.22 μm。 5.5 表面等离子体共振仪。 5.6 CM5 芯片：羧基化 SPR 芯片，如 CM51。 5.7 立式高压灭菌器。 6 测试步骤 6.1 试样准备 将纺织品试样剪成约 5 mm×5 mm，称取试样 2.0 g（精确至 0.01 g） ，放入反应器中，准确加入 40 mL 乙酸乙酯（4.1） ，拧紧盖子后置于超声波发生器（5.2）中提取 30 min，萃取液过滤至圆底烧瓶 中。试样中再加入 40 mL 乙酸乙酯，置于超声波发生器中提取 10 min。合并提取液，旋转蒸发仪浓缩 至近干，用乙酸乙酯定容至 2 mL，经聚四氟乙稀滤膜（PTFE） （5.4）过滤。必要时，用 0.2 mol/L 磷酸盐（PBS）缓冲液（4.21）稀释至所需浓度。 6.2 传感芯片的修饰 6.2.1 清洗 将 CM5 芯片（5.6）放入 SPR 仪，调节仪器进样池温度使低于室温 1 ℃ ~2 ℃，通入纯水，至基 线稳定。6.2.2 芯片活化 将 0.2 mol/L EDC 溶液（4.18）和 0.1 mol/L NHS 溶液（4.19）以体积比 1:1 混合放入仪器中，吸取 300 μL 流经芯片表面，以 10 μL/min 的流速，通入 30 min，使芯片充分活化。 6.2.3 偶联抗原 将 DMF -BSA 溶液（4.22）稀释至 50 mg/L 放入仪器中，吸取 300 μL 流经芯片表面，以 10 μL/min 的流速，通入 30 min，使抗原能充分偶联。 注：抗原浓度依据具体仪器可进行优化。3 SN/T 5286—20216.2.4 封闭 将 0.1%（质量比）BSA 水溶液（4.25）放入仪器中，吸取 300 μL 流经芯片表面，以 10 μL/min 的 流速，通入 30 min，封闭未偶联活性位点。 6.3 传感芯片的再生 检测完毕后，将甘氨酸 -盐酸溶液 （4.26） 放入仪器中，以 100 μL/min 的流速，通入 3 min，最后， 通入纯水清洗芯片。 注：芯片可以连续使用至光强强度值减少不超过 20%。 6.4 试样测试 6.4.1 单抗浓度的确定 调节仪器进样池温度使低于室温 1 ℃ ~2 ℃，以 30 μL/min 速度通入纯水，待基线趋于稳定后，加 载某一浓度的 DMF -6C6 溶液（4.23） ，待达到吸附 / 解吸附平衡后，通入纯水清洗芯片，洗去非特异 性吸附。检测完毕后进行芯片再生（6.3） 。以共振响应单位△ RU 值为纵坐标，以加入的单抗溶液浓 度为横坐标绘制曲线。例如，曲线达到平衡的浓度即为合适的竞争物浓度，如 40 mg/L。 6.4.2 标准曲线的建立 调节仪器进样池温度使低于室温 1 ℃ ~2 ℃，以 30 μL/min 速度通入纯水，待基线趋于稳定。将 DMF/DMF -6C6 标准溶液（4.24）放入仪器中，吸取 300 μL 流经芯片表面，以 10 μL/min 的流速，通 入 30 min。检测完毕后进行芯片再生（6.3） 。以共振响应单位△ RU 值为纵坐标，以 DMF/DMF -6C6 标准溶液中 DMF 浓度为横坐标绘制标准曲线。 6.4.3 试样测试 调节仪器进样池温度使低于室温 1 ℃ ~2 ℃，以 30 μL/min 速度通入纯水，待基线趋于稳定。将试 样提取液（6.1）放入仪器中，吸取 300 μL 流经芯片表面，以 10 μL/min 的流速，通入 30 min。检测 完毕后进行芯片再生（6.3） 。 6.4.4 空白试验 除不加试样外，按上述 6.1 和 6.4.3 测定步骤进行。 7 结果计算 按照 6.4.2 绘制的标准曲线，进行四参数 Logistic 曲线拟合，按照拟合曲线计算样品相应的浓度 值Ci。按式（1）计算富马酸二甲酯的含量： ��������������� （1） 式中： Xi ——试样中富马酸二甲酯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） ； ci ——样品中富马酸二甲酯的浓度，单位为微克每毫升（ μg/mL） ； c0 ——空白样品中富马酸二甲酯的浓度，单位为微克每毫升（ μg/mL） ； V ——萃取液体积，单位为毫升（mL） ； k ——稀释倍数；4 SN/T 5286—2021m ——试样质量，单位为克（g） 。 试验结果按 GB/T 8170 规定修约至小数点后一位。 8 测定低限 本标准中富马酸二甲酯含量的测定低限为 0.01 mg/kg。 9 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对 象相互独立进行的两次独立测试的结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的 25 %。 10 试验报告 试验报告至少应给出下述内容： a）样品来源及描述；b）采用的试样前处理方法； c）采用的定量方法； d）测试结果； e）任何偏离本标准的细节； f）采用的标准；g）试验日期。