以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5270 —2019 中华人民共和国海关总署 发 布ICS 71.040.99 G 70 2019 -12-27发布 2020 -07-01 实施橡胶及其制品中亚乙基硫脲的测定 高效液相色谱法 Determination of ethylene thiourea in rubber and rubber products — High performance liquid chromatography以正式出版文本为准以正式出版文本为准I SN/T 5270—2019前 言 本标准按照 GB/T 1.1— 2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福州海关、中华人民共和国宁波海关。本标准主要起草人：丁立平、郑香平、陈旻实、刘正才、蔡春平。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1 SN/T 5270—2019橡胶及其制品中亚乙基硫脲的测定 高效液相色谱法 1　范围 本标准规定了橡胶及其制品中亚乙基硫脲含量测定的高效液相色谱检测方法。 本标准适用于橡胶及其制品中亚乙基硫脲的测定。本标准中亚乙基硫脲的测定低限为 2.0 mg/kg。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3　方法提要 橡胶及其制品中的亚乙基硫脲经甲醇超声提取，提取液浓缩后经固相萃取净化，用高效液相色 谱仪测定，外标法定量。 4　试剂和材料 除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯以上试剂，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1　乙腈：色谱纯。 4.2　甲醇。4.3　 亚 乙 基 硫 脲（ethylene thiourea， 简 称 ETU，CAS 号：96-45-7， 分 子 式：C 3H6N2S ） ：纯度大于 98.0%。 4.4　叔丁基 -4- 羟基苯甲醚（BHA） ：纯度大于 99.9%。4.5　 亚乙基硫脲标准储备溶液：准确称取适量标准品，用乙腈溶剂溶解，并配制成浓度为 1000.0 mg/L 的标准储备液，冷藏保存于 -4 ℃冰箱中，保存 2 个月。4.6　BHA 溶液（10.0 g/L） ：取 1.0 g 的 BHA 溶解于少量甲醇，并定容至 100 mL，备用。4.7　流动相：乙腈 : 水 =30 : 70，体积比，现配现用。 4.8　固相萃取柱：N- 丙基乙二胺（PSA）小柱，500 mg/6 mL。 5　仪器和设备5.1　高效液相色谱仪：配备二极管阵列检测器。 5.2　分析天平：感量 0.1 mg 和 1 mg。5.3　超声波清洗器，具有加热功能。以正式出版文本为准2 SN/T 5270—20195.4　旋转蒸发器。 5.5　具塞塑料离心管：50 mL。5.6　浓缩瓶 : 100 mL。5.7　涡旋混合器。5.8　离心机，转速大于 5 000 r/min。5.9　冷冻破碎机，转速大于 15 000 r/min，配备可用于液氮冷却的研磨杯。5.10　针式水相过滤头：0.45 μm。 6　测定步骤 6.1　样品制备 将试样剪切至 3 mm×3 mm 以下的小块，再经冷冻粉碎至粒径不超过 1 mm 的颗粒，待用。 6.2　样品处理 准确称取样品 1 g （精确至 1 mg）于 50 mL 的具塞塑料离心管（5.5）中，加入甲醇（4.2）30 mL， 加入 BHA 溶液（4.6）0.5 mL，在 40 ℃下超声提取 60 min，以 3 000 r/min 离心 3 min，全取上清液， 重新提取一次，合并提取液于浓缩瓶（5.6）中，于 40 ℃浓缩至约 2 mL。 以 5 mL 乙腈（4.1）活化固相萃取柱（4.8） ，弃去淋洗液；将活化后的固相萃取柱（4.8）置于另 一浓缩瓶（5.6）上，取上述浓缩液上柱，分别用 3 mL 和 2 mL 乙腈（4.1）洗涤浓缩瓶（5.6）并将洗涤的乙腈上柱，之后以 5 mL 乙腈（4.1）洗脱固相萃取柱（4.8） ，收集全部洗脱液。 洗脱液于 40 ℃浓缩至干，精确加入流动相（4.7）2.00 mL 溶解残留物中亚乙基硫脲，过 0.45 μm 滤膜（5.10） ，待分析。 6.3　基质校正工作曲线 取适量 4.5 中亚乙基硫脲标准储备溶液，用乙腈稀释得到浓度为 2.0 mg/L、4.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L 和 100.0 mg/L 的系列稀释标准溶液，分别取上述稀释标准溶液各 1.00 mL 添加到 1 g （精确 至 1 mg）空白样品基质中，按照 6.2 中所规定步骤操作，得到亚乙基硫脲的基质校正工作曲线，最终仪器分析的亚乙基硫脲浓度为 1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、5.0 mg/kg、10.0 mg/kg、25.0 mg/kg 和 50.0 mg/kg。 6.4　空白实验 除不称取试样外，其余均按 6.2 中步骤进行。 6.5　测定6.5.1　色谱检测条件 由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出高效液相色谱分析的通用参数。设定的参数 应保证色谱测定时被测组分与其他组分能够得到有效的分离，下列给出的参数证明是可行的。 a）色谱柱：C 18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm，或相当者； b）色谱柱温度：35 ℃ ； c）流动相： 乙腈 : 水 = 30 : 70，体积比； d）流速：1.0 mL/min ；e）检测波长：234 nm ；f）进样量：10 μL； g）运行时间：15 min。以正式出版文本为准3 SN/T 5270—20196.5.2　高效液相色谱测定 按照 6.5.1 中所设定的高效液相色谱仪的色谱检测条件，待仪器稳定后，将基质校正工作曲线工 作溶液（6.3） 、空白溶液（6.4）和样品定容液（6.2）等体积穿插进样测定。以色谱峰面积为 Y 轴， 以浓度为 X 轴，绘制标准曲线，基质校正工作曲线工作溶液和待测样品中亚乙基硫脲的响应值均应在仪器检测的线性范围内，根据色谱峰面积用外标法定量。 标准溶液的典型液相色谱图和紫外光谱图参见附录 A 中图 A.1 和图 A.2。 7　检测结果的计算与表述 用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中亚乙基硫脲残留量： )1( …………………………… m AV c A AX isi i i i×× ×−=) (0 式中： Xi ——试样中亚乙基硫脲的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） ； Ai ——样液中亚乙基硫脲的色谱峰面积； Ai0 ——空白样液中亚乙基硫脲的色谱峰面积； ci ——基质校正工作曲线工作溶液中亚乙基硫脲的浓度，单位为微克每毫升（ μg/mL） ； V ——样液最终定容体积，单位为毫升（mL） ； Ais ——基质校正工作曲线工作溶液中亚乙基硫脲的色谱峰面积； m ——最终样液所代表的试样质量，单位为克（g） 。 8　回收率和精密度 不同样品基质的添加浓度及回收率实验数据见表 1。 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10 %。 表 1　不同样品基质的添加浓度及回收率实验数据（n = 6） 样品基质 添加浓度 / （mg/kg）实测平均浓度 / （mg/kg）平均回收率 / %精密度 / % 氯丁橡胶2 4 202.10 4.04 19.97105.0101.0 99.94.452.52 1.21 氟橡胶24 202.203.99 19.79110.0 99.898.95.423.921.20 丁腈橡胶24 201.863.81 19.3393.095.3 96.71.61 1.59 2.63以正式出版文本为准4 SN/T 5270—2019附录 A （资料性附录） 亚乙基硫脲标准溶液的典型液相色谱图和紫外光谱图 图 A.1　亚乙基硫脲标准溶液的典型液相色谱图 图 A.2　亚乙基硫脲标准溶液的紫外光谱图