ICS65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3872—2021 食用菌中L一麦角硫因的测定 超高效液相色谱法 Determination of L-ergothioneine in edible fungi-Ultra high performance liquid chromatography 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3872—2021 全国农食品标准 公共服务平台 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：上海市农业科学院、农业农村部食用菌产品质量监督检验测试中心（上海）。 本文件主要起草人：张艳梅、鄂恒超、赵晓燕、周昌艳、陈磊、赵志勇、李晓贝、刘海燕、任佳丽、冯路路、 白冰、董慧、范婷婷、何香伟、李健英， 1 NY/T3872—2021 食用菌中L-麦角硫因的测定 超高效液相色谱法 1范围 本文件规定了食用菌中L-麦角硫因含量的超高效液相色谱测定方法。 本文件适用于食用菌中L-麦角硫因含量的测定。 本文件方法的定量限：鲜样为2.0mg/100g，干样为4.0mg/100g 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于 文件。 GB/T6682 分析实验 GB/T12728 食用菌 3术语和定义 TA GB/T12728 下列术语利文适用 3.1 L L-麦角硫因 L-crgothioneine) 学名2-基 不敏感，是一种具 有重要生理活 稀有天然 性氨基酸 4原理 食用菌样品中心 门配 外检测器或二极 管阵列检测器的超高 效液相色 ，以峰而积计算，外标法定量 5试剂与材料 R 6682 除非另有说明， 级水的规定。 5.1乙睛(CHCN,C) LS 色谱纯 5.2甲醇(CH,OH,CAS号：67-56-1) 色谱纯 5.3甲酸（HCOOH,CAS号 ：64-18-6），色谱纯 5.40.1%甲酸甲醇溶液：准确吸取1mL甲酸（5.3)加甲醇（5.2)定容至1000mL，混匀。 5.570%甲醇水溶液：量取700mL甲醇(5.2)加水至1000mlL,混勺。 5.60.1%甲酸乙晴溶液：准确吸取1mL甲酸（5.3)加乙睛（5.1)定容至1000mL，混匀并脱气。 5.70.1%甲酸水溶液：准确吸取1mL甲酸（5.3)加水定容至1000mL，混匀并脱气。 5.8L-麦角硫因（CgH1sN：O,S,CAS号：497-30-3)标准品：纯度≥98%。 5.9L-麦角硫因标准储备溶液配制：称取L-麦角硫因标准品10mg（精确至0.0001g），用水溶解并定容 至10mL。L-麦角硫因标准储备溶液（1000mg/L），一18℃保存，有效期2个月。 5.10L-麦角硫因标准工作溶液配制：准确移取一定量的L-麦角硫因标准储备溶液（5.9），用0.1%甲酸 甲醇溶液（5.4)逐级稀释得到一系列的标准工作溶液（质量浓度分别为1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、 10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L）。临用现配。 5.11有机系微孔滤膜：0.22μm。 1 NY/T3872—2021 6仪器和设备 6.1超高效液相色谱仪：配置有紫外检测器或二极管阵列检测器。 6.2天平：感量0.01g和0.0001g 6.3超声波清洗器。 6.4离心机：不低于4000r/min。 6.5氮气吹干仪。 6.6涡旋混合器。 6.7均质机。 6.8样品粉碎机。 6.9标准筛：0.425mm 7分析步骤 7.1试样制备 7.1.1鲜样 取不少于1000g食用菌鲜样，用干净纱布轻轻擦去表面附着物，切碎后，放置于均质机（6.7)中粉碎 成匀浆状，于密封容器中一18℃保存备用。称取试样时，冷冻试样应先解冻再混匀。 7.1.2干样 取不少于200g食用菌干样，放置于样品粉碎机（6.8）中粉碎，过0.425mm标准网筛，制成待测样， 于密封容器中常温保存备用。称取试样时，常温试样应搅拌均匀。 7.2提取 7.2.1鲜样 称取2g试样（精确至0.01g），置于50mL离心管中，准确加入40.00mL0.1%甲酸甲醇溶液（5.4)， 在超声波清洗器中超声提取10min后，于4000r/min离心5min，取2mL提取液，过0.22μm滤膜后， 取1mL滤液供超高效液相色谱仪测定。 7.2.2干样 称取1g试样（精确至0.01g），置于50mL离心管中，准确加40.00mL70%甲醇水溶液（5.5），超声 波清洗器超声提取30min后，4000r/min离心5min，取2mL提取液吹至近干，用2mL0.1%甲酸甲醇 溶液（5.4)复溶，过0.22μm滤膜后，取1mL滤液供超高效液相色谱仪测定。 7.3测定 7.3.1色谱参考条件 色谱柱：HILIC色谱柱（2.1mmX100mm，1.7μm），或相当规格色谱柱； 流动相：0.1%甲酸乙腈溶液（5.6)-0.1%甲酸水溶液（5.7)（88十12,V/V)； 流速：0.4mL/min； 柱温：40℃； 波长：262nm； 进样量：3μL。 7.3.2标准曲线的绘制 用L-麦角硫因系列标准工作溶液（5.10），参考上述色谱条件（7.3.1)进行测定，以标准工作溶液的质 量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制L-麦角硫因的标准曲线。L-麦角硫因标准工作溶液的色谱图参见 附录A。 7.3.3定量测定 2 NY/T3872—2021 测样液中L-麦角硫因的响应值应在标准曲线范围内，超出标准工作曲线1.0mg/L50.0mg/L的范围 则应稀释后再进样分析。 7.3.4空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 试样中的L-麦角硫因含量以质量分数w计，数值以毫克每克（mg/g)表示，按公式(1)计算。 m 1000 式中： 一由标准曲线得出的试样溶液中L-麦角硫因浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L)； V提取溶液体积的数值，单位为毫升（mL）； m一试样质量的数值，单位为克（g）； 厂——稀释倍数。 计算结果保留小数点后一位数字。 注：当待测样液中L-麦角硫因含量超过标准工作曲线范围时，进行稀释，即需进行稀释倍数换算。 9 精密度 在重复性条件下获得的2次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。 3 NY/T3872—2021 附录A （资料性） L-麦角硫因标准工作溶液(10.0mg/L)的色谱图 L-麦角硫因标准工作溶液(10.0mg/L)的色谱图见图A.1。 UVabsorbance, AU 0.03 PUB 0.02 NY/T 3872-2021 全国农业食品标准 冬平台 忠龚服工和国 食用菌中L-麦角硫因的测定 超高效液相色谱法 NY/T3872—2021 * （北京市朝阳区麦于店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * * * 开本880mm×1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2021年10月第1版 2021年10月北京第1次印刷 书号：16109·8731 定价：24.00元 版权专有 侵权必究 NY/T3872-2021 举报电话：（010）59194261