ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3864—2021 黄瓜棒孢叶斑病、蔓枯病、炭疽病 抗病性鉴定技术规程 Technical code of practice for identification of cucumber resistance against corynespora leaf spot, gummy stem blight, cucumber anthracnose 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3864—2021 三 八共服务 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所、天津市植物保护研究所、深圳市标准技术研究院、 中山内得农业科技有限公司。 本文件主要起草人：石延霞、李宝聚、谢学文、柴阿丽、高苇、海燕、杨志花、孙建伟。 I NY/T 3864—2021 黄瓜棒孢叶斑病、蔓枯病、炭疽病抗病性鉴定技术规程 1范围 本文件规定了黄瓜棒孢叶斑病、蔓枯病和炭疽病抗病性鉴定术语和定义、接种体制备、室内抗病性鉴 定、病情调查、抗病性鉴定。 本文件适用于各种类型的黄瓜品种及 金源棒孢叶斑病、 枯病、炭疽病的室内抗性鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通 的条款 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本 用月 包括 有的修改单）适用于本 文件。 GB/T17980 试验准 GB/T1798 NY/T185 病鉴定技术规程 NY/T18 病鉴定技术规程 URAL EARCH 3 术语和定 下列术语 3. 1 斑病 黄瓜棒孢 umbeptarge 由多主棒 3 3. 2 黄瓜蔓枯米 gumm blight 由黄瓜壳 3. 3 黄瓜炭疽病 由葫芦科刺盘孢 etotrichiim 3. 4 抗病性 disease resistan 植物体所具有的能够减轻或 克服病原物致病作用的可遗传 3. 5 致病性pathogenicity 病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力， 3. 6 抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance 通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抗性水平。 3.7 病情级别diseaseratingscale 人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。 3. 8 人工接种artificialinoculation NY/T3864—2021 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体适当部位并使之发病的过程 3. 9 接种体inoculum 用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分 3.10 接种悬浮液 inoculumsuspension 用于接种的含有定量接种体的液体。 3. 11 病情指数diseaseindex(DI) 通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述 4病原物接种体制备 4.1接种体繁殖 挑取保存在试管中的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PotatoDextroseAgar，简称PDA）斜面上的多主棒 孢、黄瓜壳二孢菌或葫芦科刺盘孢菌至PDA平板上培养，置26℃～28℃下培养10d，待培养基表面产生 大量孢子，用灭菌水洗下分生孢子，并制成浓度约为每毫升5×105个孢子的接种体悬浮液。 4.2接种体保存 4.2.1短期保存方法 将单抱分离纯化的黄瓜多主棒抱、黄瓜壳二抱菌或葫芦科刺盘抱菌接种在PDA斜面试管内，在 26℃～28℃下培养，10d后置4℃冰箱内保存，保存期1个月～2个月。 4.2.2长期保存方法 体石蜡在使用前需要经过121℃高压蒸汽灭菌20min，置一4℃～4℃下保存2年。 5鉴定条件和试验设计 5.1鉴定环境 苗期抗病性鉴定的鉴定室具备人工调节室内温度、湿度和光照条件，具备良好的发病环境 5.2鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复不少于10株苗。 5.3鉴定对照材料 选择1个感病对照和1个抗病对照，如果生产中无抗性品种，抗性对照可不选。感病对照要求高度感 病，选择标准为规定接种量及适宜环境条件下病情指数达到感病程度，且感病性稳定；抗病对照品种选用 在规定接种量及适宜环境条件下病情指数达到抗病程度，且抗病性稳定。 6接种 6.1鉴定材料育苗 鉴定材料种子经1%次氯酸钠溶液浸泡10min，清水冲洗3次后置于恒温培养箱中28℃催芽，待胚 （121℃,30min)后使用。在日光温室里育苗，室内温度18℃～28℃。幼苗应健壮无病、生长一致。 6.2接种时期 幼苗在培养至1片～2片真叶期进行接种。 6.3接种体浓度 每毫升5×105个孢子。 6.4接种方法 2 NY/T3864—2021 采用喷雾法接种，用小型手持喷雾器喷雾接种黄瓜叶片的正反两面，至液滴均匀分布而不流下叶面。 6.5 接种后的管理 6.5.1 接种后24h的管理 接种后的植株置于温度为25℃～30℃的保湿棚内，保湿棚内相对湿度（RelativeHumidity，RH）保 持在85%~100%，黑暗保湿24h。 6.5.2接种保湿24h后的管理 24h保湿后，每天光照12h~14h，保证RH80%～90%，培养温度25℃～30℃，正常栽培管理。 病情调查 7. 1 病情级别划分 苗期病情级别及其相对应的症状描述见表1、表2和表3。 表1 黄瓜棒孢叶斑病病情级别的划分 病情级别 症状描述 0 无症状 1 病斑面积占整片叶面积的5%以下 3 病斑面积占整片叶面积的5%～25% 5 病斑面积占整片叶面积的26%～50% 7 病斑面积占整片叶面积的51%～75% 9 病斑面积占整片叶面积的75%以上 表2 黄瓜蔓枯病病情级别的划分 病情级别 症状描述 0 无症状 1 病斑面积占整片叶面积的5%以下 3 病斑面积占整片叶面积的5%～25% 5 病斑面积占整片叶面积的26%~50% 7 病斑面积占整片叶面积的51%~75% 9 病斑面积占整片叶面积的75%以上 表3 黄瓜炭疽病病情级别的划分 病情级别 症状描述 0 无症状 1 病斑面积占整片叶面积的5%以下 3 病斑面积占整片叶面积的5%～10% 5 病斑面积占整片叶面积的11%～25% 7 病斑面积占整片叶面积的26%～50% 9 病斑面积占整片叶面积的51%以上 7. 2 调查时间 接种后10d左右，感病对照充分发病且病情稳定时进行。 7. 3 病情记载 调查记载每一鉴定植株的病情级别，并计算病情指数。 病情指数按公式(1)计算。 Z(s ×n) DI X 100 NXS (1) 式中： DI 病情指数； 3 NY/T3864—2021 各病情级别代表数值； n 各病情级别的叶片数； N 调查总叶片数； S 最高病情级别的代表数值。 抗病性鉴定 8.1 抗病性鉴定标准 依据鉴定材料3次重复的病情指数（DI)平均值确定其抗性水平，划分标准见表4、表5和表6。 表4 黄瓜对棒孢叶斑病抗性水 的鉴定标准 病情指数(D 抗性鉴定 DI JB 色疫（I) 高市 HR) 感光 的鉴定标 .6 <75 S) (HS) 8.2抗病性鉴定有效性判别 感病对照材料达到其相应感病利 吉瓜棒狗叶垢 炭疽病发生DI>55，黄瓜蔓枯病发生 DI>50时，该次抗病性鉴定视为有效 NY/T3864—2021 附录A （资料性） 黄瓜棒孢叶斑病菌、黄瓜蔓枯病菌和黄瓜炭疽病菌 A.1学名和形态描述 A.1.1学名 黄瓜棒孢叶斑病病原菌：多主棒孢Corynesporacassiicola（Berk.&.Curt.）Wei 黄瓜蔓枯病病原菌：黄瓜壳二孢AscochytacucumerisFautrey&.Roumeguere 黄瓜炭疽病病原菌：葫芦科刺盘孢Colletotrichumorbiculare（Berk.）Arx A.1.2形态描述 多主棒孢Corynespora cassicola（Berk.&Curt.）Wei菌株在PDA培养基上为灰色或淡棕色，中间 略呈橄榄绿色，毛状，平展。菌丝体通常在下层，有分枝，具隔膜，颜色半透明至浅棕色，壁光滑，菌丝厚 2μm～6μm，无子座。分生孢子梗生于菌丝，单生或分枝，直或稍弯，灰白色至中棕色，具有0个～9个 圆柱状层出梗，具隔膜，大小（110～850）μm×（4～11）μm。分生孢子单生或链生，分生孢子梗顶端形 成层出梗，层出梗顶端产生分生孢子，分生孢子直或弯，倒棍棒状或圆柱状，光滑，半透明至橄榄色 4个~20个假隔膜，（40~220）μm×（9~22）μm，基脐平截，宽度为4μm~8μm（见图A.1和图 A.2)。 图A.1多主棒孢在PDA上菌落正面 图A.2多主棒孢在PDA上菌落背面 黄瓜壳二孢AscochytacucumerisFautrey&.Roumeguere菌株在PDA培养基上气生菌丝生长速度 快，边缘稀疏，为灰白色，中间稠密，为灰黑色至橄榄绿色；基内菌丝为灰黑色，呈放射状。不形成分生孢子 器（小黑点）。病原菌分生孢子器球形至扁球形，直径40μm～50μm，器壁膜质，淡黄色；分生孢子椭圆形 至长卵形，无色，双细胞，大小（8.8~11.0）μm×（2~2.5）μm（见图A.3）。 图A.3黄瓜壳二孢在PDA上培养性状 葫芦科刺盘孢Colletotrichumorbiculare（Berk.）Arx在PDA上菌落中央黑褐色，稍有白色菌丝，边