ICS65.020.01 CCS B 05 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3860—2021 芹菜抗根结线虫鉴定技术规程 Technical code of practice for identification of celery resistance against root-knot nematode(Meloidogyne spp.) 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3860—2021 全国农食品标准 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化车作导则 食 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口 本文件起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所、恩施土家族苗族自治州农业科学院、苏州市食品 检验检测中心。 本文件主要起草人：苑振川、杨宇红、殷红清、徐东辉、谢丙炎、凌键、李彦、赵建龙、张雅涵 I NY/T3860—2021 芹菜抗根结线虫鉴定技术规程 1范围 本文件确定了芹菜抗根结线虫鉴定相关的术语和定义，并规定了芹菜抗根结线虫的鉴定方法和抗性 评估方法。 本文件适用于芹菜（ApiumgraveolensL.）品种、资源材料对根结线虫（Meloidogynespp.）（见附录 A)的抗性鉴定。 2 规范性引用文件 PUBL 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本 文件。 Q NY/T1858.8 番茄抗南万根 病鉴定技术规程 3 3术语和定义 S 下列术语和定义 适用于 3. 1 芹菜根结线虫病 root-kndt nehatode disease 由根结线虫（ nespp漫染芹荣根系而引起的 3. 2 抗病性 diseas seresistanc 植物体所具 轻或克服病原物致病作用的可遗 3. 3 人工接种 artifi icial inoculation 在适宜条件下 置于植物体适当部位 3. 4 G 接种体inoculum 用于接种以引起病害的病原物或病原物的 3.5 病情级别diseaseratingscale 人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。 3. 6 病情指数disease index(DI) 通过对植物个体发病程度（病情级别)数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述， 4抗性鉴定 4.1芹菜育苗 将草炭、蛭石和细砂按体积2：1：1混合均匀，121℃湿热灭菌2h，作为育苗基质。芹菜种子用 0.5%次氯酸钠消毒1min～2min，用灭菌水冲洗3次，在17℃下避光催芽，当种子露白时播种，在温度 20℃、湿度70%～80%条件下育苗。芹菜苗2叶～3叶期移裁到直径10cm的苗钵。 1 NY/T3860—2021 4.2接种体分离、保存及制备 4.2.1接种体分离 采集感染根结线虫的病株，直接挑取根结上的卵块，单卵块接种在感病寄主植物根际土壤中，在 25℃～28℃、土壤相对湿度70%～80%条件下培养40d～60d，收集在根系上的卵块，确定分离成功。 4.2.2接种体繁殖及保存 将根结线虫卵块接种在高感寄主植物的根部，在25℃～28℃、土壤相对湿度70%～80%条件下培 养，并且每60d进行一次线虫分离、接种，对根结线虫进行扩繁及保存。 4.2.3接种体制备 将根结线虫卵块用0.5%次氯酸钠消毒1min2min，然后用灭菌水冲洗3次，卵块转移至100日标 准筛网上，放人培养皿内，加入大约10mL灭菌水，使卵块与水面接触。在25℃～28℃下避光孵化2d~ 3d，收集二龄幼虫，制备每毫升1000条的线虫悬浮液用于接种鉴定。 4.3接种时期 芹菜苗4叶～5叶期接种。 4.4接种数量 每株接种根结线虫二龄幼虫1500条。 4.5接种方法 接种时，在距芹菜苗主根2.0cm周围，在三个不同方向各打1个小孔，深度为1cm，分别接种0.5mL 线虫悬浮液，并轻压封闭孔口，合计接种线虫1500条/株。每份鉴定材料接种10株苗，重复3次。 4.6感病对照 选择病情指数大于60的芹菜品种作为感病对照，建议可以选择荷兰巨芹、天津实心芹等品种。 4.7接种后管理 植株在温度25℃左右、相对湿度70%～80%，自然光照条件下，按照正常生产条件进行管理。 4.8病情调查 4.8.1调查时间 接种后40d左右调查。 4.8.2调查方法 轻轻挖取芹菜植株根系，并用自来水冲洗干净，检查根结情况。根据具有根结的根系占所有根系的比 例确定病情级别划分（见表1)，并将有关信息和统计数据记入附录B。计算病情指数(DI)，计算公式分别 按照NY/T1858.8的规定执行。 表1 病情级别划分 病情级别 症状 0 所有根系上没有根结 1 有根结的根系比例为0%10% 2 有根结的根系比例为11%～25% 3 有根结的根系比例为26%~50% 4 有根结的根系比例为51%～75% 5 有根结的根系比例为76%～100% 病情指数(DI)按公式(1)计算。 Z(s X n) DI= NXS X100 (1) 式中： 各病情级别数值与各病情级别植株数乘积的总和； 各病情级别数值； n 各病情级别病株数； 2 NY/T3860—2021 N—调查总株数； S 一最高病情级别数值。 4.9鉴定材料后处理 鉴定完毕后将芹菜植株、残体及育苗基质集中进行无害化处理。 抗性鉴定评估 5.1 抗性鉴定级别 抗性鉴定划分为5个级别，见表2。 表2 芹菜对根结线虫的抗性鉴定划分 病情指数(DI) 抗性鉴定级别 DI=0 免疫(I) 0<DI≤10 高抗(HR) 10<DI30 抗(R) 30<DI60 感(S) DI>60 高感(HS) 5.2 鉴定有效性判别 用平均病情指数作为评价标准，当感病对照的平均病情指数在大于60时，该次抗性鉴定判定为有效。 5.3抗性鉴定结果 调查芹菜鉴定材料的病情指数（DI），按照抗性评价划分标准（见表2)确定芹菜材料对根结线虫的抗 性水平，对鉴定材料进行抗性鉴定，并附原始调查记录（见附录B)。 3 NY/T3860—2021 附录A (资料性) 根结线虫 A.1学名和形态描述 A.1.1学名 根结线虫（Meloidogyne:spp PUBL ISHIN A. 1.2 形态描述 根结线虫 二龄幼虫 5um 雌雄异形，雌成虫梨 形，埋藏于寄主组织内 大小4 00)μmX(325~700) 食道垫刃型， 中食道球发达。雄成虫线 状，尾端稍圆， 小 100Y um; ：师为长格圆形大 8μm。会阴花纹因 线虫种类不同 品现 出不同物 征（见图A南方根 结线虫背高呈方开 平消至波浪 状，在侧面一些线 纹具有分支 明显的 线 瓜呼根结线虫的会阴花纹青近圆形而扇 背面线纹 文和腹面线纹形成 侧沟，很少有线 穿过 花生根结线虫的会阴花纹背马扁平车圆形·背而线 文在侧线出有 分叉，腹面线纹 形成肩状突起 古线虫的公阴花纹为近圆形室扇平的卵圆形，背写不 象耳豆根结线虫会阴花纹特征主要表现在整体量 圆形到椭圆形，背弓较高， 波浪形，在尾端 线纹较细，由平 骨到波浪状 昆区环纹 规则，侧线不明显 工 CENT GRI 标引序号说明： 南方根结线虫（M.incognita）； 北方根结线虫（M.hapla）； 爪哇根结线虫（M.jaxnica）； 5 象耳豆根结线虫（M.enterolobii）。 花生根结线虫（M.arenaria）； 图A.1主要根结线虫的会阴花纹墨线图 4 NY/T 3860—2021 附录B (资料性） 鉴定结果记录 芹菜抗根结线虫鉴定结果记录表见表B.1 表 B. 1 芹菜抗根结线虫鉴定结果记录 品种/材料 编号 病情级别 来源 病情 平均 抗性 名称 重复区号 0 1 2 3 4 5 指数 病指 鉴定 1 感病对照 II II 2 品种1 II III 3 品种2 = II 1 .. .. = II 播种日期 接种日期 接种生育期 根结线虫种类 线虫学名 调查日期 记录人 地点 鉴定人(签字)： 5