ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3858—2021 番茄抗匍柄霉叶斑病鉴定 技术规程 Technical code of practice for identification of tomato to stemphylium leaf spot 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3858—2021 言 全国农前食品标准 共服务平台 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所、宁夏大学、浙江省农业科学院植物保护与微生物 研究所。 本文件主要起草人：谢学文、李宝聚、石延霞、柴阿丽、张雪艳、武军。 I NY/T 3858—2021 番茄抗匍柄霉叶斑病鉴定技术规程 1范围 本文件规定了番茄匍柄霉叶斑病抗病性鉴定术语和定义、接种体制备、抗病性鉴定、病情调查、抗病性 鉴定记录表格。 本文件适用于各种类型番茄品种及资 源对葡柄霉叶斑病 的室内抗性鉴定。 2规范性引用文件 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适 用 包括 有的修改单)适用于本 文件。 GB/T17980 和晚疫病 NY/T1958 交病鉴定技术规程 NY/T195 病鉴定技术规程 术语和定 IRA 下列术语 1 3. 1 番茄匍柄霉 叶斑病 tomat mphylium leaf spot 由茄匍柄 Semp (Stemphytt 动起 Ders 斑病。 3. 2 抗病性 植物体所 能够 原体致病作 用的可 遗传的性 3. 3 R 抗病性鉴定 sip jo uonedau istance 通过适宜技术 鉴别植物 3. 4 抗性评价resistance evaluation 根据采用的技术标准判另 物对特定病害 反应程度利 抗水平的 3. 5 致病性pathogenicity 病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力。 3. 6 人工接种artificiaf inoculation 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体适当部位并使之发病的过程。 3.7 病情级别diseaseratingscale 植物个体或群体发病程度的数字化描述 3.8 接种体inoculum 用于接种以引起病害的病原体或病原体的一部分。 1 NY/T3858—2021 3. 9 接种悬浮液inoculumsuspension 用于接种的含有定量接种体的液体 3. 10 病情指数diseaseindex（Dn) 全面评价发病率和严重程度的综合指标数值。 4接种体制备 4.1接种体分离 采用常规组织分离法，从番茄植株发病组织病健交界处分离病原物 4.2接种体鉴定 菌饼法诱导产孢鉴定：选择感病番茄品种，匍柄霉菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PotatoDextrose Agar，简称PDA)上培养3d后，用5mm打孔器打取菌饼，将带有菌丝面贴到番茄叶片上，接种后置于 25℃～30℃条件下保湿培养，3d后菌饼背面产孢，可参考附录A进行鉴定。 4.3接种体保存 4.3.1短期保存方法 将单孢分离到的匍柄霉菌株接种在PDA试管斜面内，在26℃～28℃下培养，10d后置4℃冰箱内 保存，保存期1个月～2个月。 4.3.2长期保存方法 采用液体石蜡油低温保存法，即在斜面菌种上加一层灭菌的优质液体石蜡（高出斜面顶部1cm），液 4.4接种体繁殖与悬浮液制备 将供试菌株从试管中转人PDA平板，25℃黑暗条件下活化两次后，转接到PDA平板培养5d～7d， 中培养好的菌丝球用双层纱布过滤，然后用组织捣碎机将菌丝打碎。再将打碎后的菌丝用离心机以 4000r/min的速度离心10min，弃上清液，取沉淀物加人适量的含1%吐温-40的蒸馏水稀释，用分光光 度计（波长600nm）检测，菌丝菌悬液的浓度稀释到吸光度值1.55~1.65。 5鉴定条件和试验设计 5.1鉴定环境 人工接种鉴定室应温度、湿度及光照条件可控，使植物（番茄）人工接种后具备良好的发病环境。 5.2鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复至少3次，每一重复10株苗。 5.3鉴定对照材料 选择1个感病对照和1个抗病对照，如果生产中无抗性品种，抗性对照可不选。感病对照要求高度感 病，选择标准为规定接种量及适宜环境条件下病情指数达到高感程度，且感病性稳定；抗病对照品种选用 在规定接种量及适宜环境条件下病情指数低于10，且抗病性稳定。 6接种 6.1鉴定材料育苗 鉴定材料种子在1%次氯酸钠中浸种10min，无菌水冲洗后置于恒温培养箱中28℃催芽，芽长 1mm～3mm时播种于50孔育苗钵中，覆土厚度1cm～2cm。育苗基质为草炭、蛭石和珍珠岩（3：1： 1），经高温蒸汽灭菌（121℃，30min）。在日光温室内育苗，室内温度为20℃～25℃，每钵一苗，所有幼苗 应生长健壮、一致。 2 NY/T3858—2021 6.2接种时期 幼苗长至2叶1心时进行接种。 6.3接种方法 采用喷雾法接种，取制备好的接种悬浮液用小型喷雾器均匀喷布于番茄叶片的正反两面，接种量以叶 片不滴落为宜。 6.4接种后的管理 6.4.1接种后24h的管理 接种后置于25℃～30℃接种室内，黑暗保湿24h，保湿棚内相对湿度（RelativeHumidity，RH)在 85%~100% 6.4.2接种保湿24h后的管理 24h保湿后，每天光照12h～14h，保证RH80%～90%，培养温度25℃～30℃，正常栽培管理。 7病情调查 7.1病情级别划分 苗期病情级别及其相对应的症状描述见表1。 表1番茄匍柄霉叶斑病病情分级标准 病害级别 症状描述 0 无病斑 1 病斑面积占整个叶面积的5%以下 3 病斑面积占整个叶面积的5%～25% 5 病斑面积占整个叶面积的26%~50% 7 病斑面积占整个叶面积的51%~75% 9 病斑面积占整个叶面积的75%以上 7.2病情调查 接种10d左右，感病对照充分发病且病情稳定时进行。 7.3病情记载 参照附录B调查记载每一鉴定植株的病情级别，并计算病情指数。 病情指数按公式(1)计算。 Z(s Xn) DI : X100 NXS (1) 式中： DI 病情指数； s 各病情级别代表数值； n 各病情级别的叶片数； N 调查总叶片数； s 最高病情级别的代表数值。 8抗病性鉴定 8.1 抗病性鉴定标准 依据鉴定材料3次重复的病情指数(DI)平均值确定其抗性水平，划分标准见表2。 3 NY/T3858—2021 表2番茄匍柄霉叶斑病抗性评价标准 病情指数(DI) 抗性鉴定 免疫(I) 0<DI<10 高抗（HR） 10≤DI<30 抗病(R) 30≤DI<50 中抗（MR) 50≤DI<75 感病(S) DI≥75 高感（HS) 8.2抗病性鉴定有效性判别 感病对照材料达到其相应感病程度,当番茄匍柄霉叶斑病发生(DI)≥50,该批次抗病性鉴定视为 有效。 NY/T 3858—2021 附录A （资料性） 番茄葡柄霉叶斑病菌 A.1学名 茄匍柄霉（Stemphyliumsolani） 番茄匍柄霉（Stemphyliumlycopersici） A.2形态描述 茄匍柄霉（Stemphyliumsolani）在PDA培养上，25℃～28℃条件下进行匍柄霉培养，菌落匍匐生 长，颜色为淡褐色或褐色。菌丝体表生或部分埋生，密集丛生。菌丝直径2.5μm～3μm。分生孢子梗直 较深，囊状产孢节处具有小刺突或呈不规则粗糙状，其他部位一般光滑，具有1个～5个隔膜，（90～ 卵圆形至近桶形，淡青褐色到深青褐色，具有1个～3个横隔膜，1个～4纵隔膜，中横隔膜处明显缢缩，其 他横隔膜处轻微至明显的缩，表面具微疣，至明显疣突或小刺。（28～32.5）μm×（19～25）μm，平均 31μm×21.3μm，长/宽=1.5~1.7,平均1.6。 番茄匍柄霉（Stemphyliumlycopersici）在平板计数琼脂培养基（PlateCountAgar，简称PCA）25℃ 条件下，培养2周～3周，菌落匍匐生长，初淡褐色，后逐渐中褐色或褐色，绒毛状，菌落直径5cm7cm， 背面观黑褐色。菌丝体表生或者埋生。菌丝淡褐色至中褐色，光滑，有分隔，叉状分支，直径1.7um～ 2.5μm。分生孢子梗单生，圆柱状，侧生于菌丝上或直接着生于菌丝顶端，不分枝，分隔，3个～6个隔膜， （80～117）μm×（4.5～5）μum。分生孢子以内壁芽生式产生于分生孢子梗顶端囊状膨大部位的产孢孔 处，囊状体直径8.9μm~9.5μm，产孢孔直径4μm~5.3μm，节囊状膨大部位淡褐色，其余部位淡褐色 光滑。分生孢子单生，顶生，长方形或棍棒型，分生孢子的顶端假喙状尖细，自顶部至基部细胞渐变窄细， 直立或略弯曲，淡褐色至深褐色，具2个～3个横隔膜，没有纵隔膜，有1个～2个明显的缢缩现象，分生孢 子表面光滑，成熟分生孢子（50~68）μm×（13~18）μm，长/宽=2.6~3.1。 图1茄匍柄霉在PDA上菌落正面 图2茄匍柄霉菌在PCA上菌落背面 5