ICS 65.020.01 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3857—2021 十字花科蔬菜抗根肿病鉴定 技术规程 Technical code of practice for identification of cruciferous vegetables to clubroot disease 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3857—2021 2公共服务平台 本文件按照GB/T1.12 -2020标准化工作导则 起草。 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本文件起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研 究所、新疆农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：柴阿丽、李宝聚、石延霞、谢学文、李磊、宋卫国、许建军、何伟。 I NY/T3857—2021 十字花科蔬菜抗根肿病鉴定技术规程 1范围 本文件规定了十字花科蔬菜抗根肿病鉴定的术语和定义、接种体制备、鉴定条件和实验设计、接种、病 情调查和抗病性评价。 本文件适用于白菜、甘蓝、青花菜、花菜、油菜、菜素、鸟 塌菜、芥菜、芥蓝、萝下品种及资源对根肿病 抗性的室内鉴定，其他十字花科作 物可参照使用 2规范性引用文件 下列文件中的内 通遇 中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版 （的修改单）适用于本 文件。 GB/T 2000 NY/T146 蔬菜根肿病 3术语和定义 下列术语和 3. 1 菜根肿病 十字花租 蔬 isease of cruciferous vegetable 由芸墓根肿 菊HPta 的一种土传病 害，主要症状 棒状或球形，地 上部菱為、矮化 株生长 3. 2 C 抗病性 植物体所具有 病作用的可遗 3. 3 人 抗病性鉴定 identification ofdisease resistance 通过适宜技术方法鉴 直物对特 3. 4 抗病性评价evaluationofre istancelevels 根据采用的技术标准判别植物对特 定病害反应程度和抵抗水平的描述。 3.5 生理小种physiologicalrace 病原物种内在形态上无差异，但在不同种植物和品种上具有显著致病性差异的类群。 3. 6 鉴别寄主diagnostichost 用于鉴定和区分特定病原物的生理小种/致病型/株系的一套带有不同抗性基因的寄主品种、品系或 材料。 3.7 人工接种artificialinoculation 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体的适当部位并使之发病的过程。 1 NY/T3857—2021 3.8 接种体inoculum 用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。 3.9 接种悬浮液inoculumsuspension 用于接种的含有定量接种体的液体。 3. 10 病情级别diseaseratingscale 人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。 3.11 病情指数diseaseindex(DI) 通过对植株个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。 4接种体制备 4.1病原物采集 由间采集具有典型症状的十学花科蔬菜根肿病发病肿根，轻轻去除表面土壤，用自来水冲洗十净，滤 纸擦干，置于一20℃冰箱保存，备用。 4.2生理小种鉴定 对用于抗病性鉴定接种的病原物首先进行生理小种的鉴定，鉴定方法见附录B。 4.3接种体繁殖和保存 4.3.1接种体繁殖 在温室内，将根肿病菌接种在感病品种根部进行繁殖。接种前，取一定质量的发病肿根，加人适量无 菌水，用组织捣碎机打碎肿根，八层纱布过滤，弃沉淀。滤液装入50mL离心管，2500r/min离心10min， 弃上清液。加入无菌水悬浮沉淀，用血球计数板计数调节至接种浓度，用灌根法接种于两叶一心期的感病 品种幼苗根际周围。接种后将其置于温度为20℃25℃（白天）/15℃18℃（夜晚），相对湿度70%~ 80%的培养室内。 4.3.2接种体保存 接种后45d～60d，将植株根部拔出收获肿根，用自来水洗净后，置于一20℃冰箱保存。记录接种体 材料来源、繁殖寄主品种、生理小种类型、日期和人员信息。 5鉴定条件和试验设计 5.1鉴定环境 苗期抗病性鉴定的鉴定室应具备温度、湿度和光照的可控条件。具体为温度20℃～25℃（白关天） 15℃～18℃（夜晚），光照度不低于100001x（相当于光通量天于200lm），光周期16h光照/8h黑暗。 5.2鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每重复不低于30株苗。 5.3鉴定对照材料 选择1个感病对照和1个抗病对照，如果生产中无抗性品种，抗性对照可不选。感病对照要求高度感 病，选择标准为规定接种量及适宜环境条件下病情指数达到高感程度，且感病性稳定；抗病对照品种选用 在规定接种量及适宜环境条件下病情指数低于15，且抗病性稳定。 5.4鉴定材料育苗 鉴定材料种子经1%次氯酸钠溶液浸种10min，用无菌水冲洗后，清水冲洗3次后置于恒温培养箱中 2 NY/T3857—2021 节基质pH为6.0士0.5，基质经高温蒸汽灭菌（121℃，30min）后方可使用。在日光温室里育苗，室内温 度20℃～25℃（白天）/15℃～18℃（夜晚）。幼苗应健壮无病、生长一致。 6接种 6.1接种时期 幼苗在1片～2片真叶期进行接种。 6.2接种浓度 约每毫升3×10°个休眠孢子。 6.3基质水分条件 基质含水量大于90%。 6.4接种方法 采用灌根法接种。取配制好的接种悬浮液，均匀灌入十字花科蔬菜幼苗根际周围，每株幼苗灌入 5mL接种悬浮液。 6.5接种后管理 接种后，将植株置于鉴定室内。保持鉴定室温度为20℃～25℃（白天）/15℃～18℃（夜晚），光照度 不低于10000lx（相当于光通量大于200lm），光周期为16h光照/8h黑暗。接种后前2周，保证基质含 水量大于90%，确保根肿菌侵染幼苗根部。之后定期浇水，保证植株正常生长。从播种到调查不使用任 何杀菌剂。 7病情调查 7.1调查时间 接种后45d～60d，感病对照充分发病且病情稳定时进行。 7.2调查方法及病情级别划分 调查时轻轻将植株连根拔起，仔细清除根部基质，并用水冲洗干净，然后逐株检查十字花科植株根系 发病症状，根据主根、侧根和须根上的肿瘤大小及数量确定病情级别。幼苗病情级别及其相对应的症状描 述见表1。 表1十字花科根肿病病情级别划分 病情级别 症状描述 0 根部生长正常，无明显症状 主根未发病，肿根只附着在侧根或须根上，占全部根系1%～25% 主根有轻微肿大，侧根或须根上肿根占25%50% 3 主根肿大较明显，肿根占根系50%~75% 4 主根形成大块肿瘤，肿根占根系75%以上 7.3病情记载 调查记载每一鉴定植株的病情级别，并计算病情指数（DI）。十字花科蔬菜抗根肿病鉴定病情记录表 格见附录C。 病情指数按公式(1)计算。 Z(s Xn) DI: X100 NXS (1) 式中： DI 病情指数； s 各病情级别的代表数值； n 各病情级别的植株数； N 调查总植株数； 3 NY/T3857—2021 一最高病情级别的代表数值。 8 抗病性评价 8.1 抗病性评价标准 依据鉴定材料3次重复的病情指数（DI)平均值确定其抗性水平，划分标准见表2。 表2十字花科蔬菜对根肿病抗性的评价标准 病情指数(DI) 抗病性评价 DI=0 免疫Immune（I) 0<DI≤5 高抗Highresistant(HR) 5<DI≤ Resistant(R) 15 ode resistant(MR) ible(S) ible(HS) 8.2 鉴定有效性 味 感病对照品 S NY/T3857—2021 附录 A （资料性） 十字花科蔬菜根肿病病原菌和典型发病症状 A.1病原菌 A.1.1学名 芸根肿菌（PlasmodiophorabrassicaeWoronin）。 A.1.2分类地位 原生生物界、根肿菌门、根肿菌纲、根肿菌属。 A.1.3寄生性 芸墓根肿菌是一种严格的专性寄生菌，不能在人工培养基上繁殖、生长，专性寄生于十字花科植株 根部。 A.1.4形态描述 芸墓根肿菌休眠孢子囊球形或近球形，孢壁有乳状突起，直径2.1μm～3.1μm，平均直径2.5μm，有 些抱子间有絮状物连接，抱子排列紧密（见图A.1）。 10m 休眠孢子在寄主细胞内的着生 休眠孢子在寄主细胞内的着生 芸菜根肿菌休眠孢子 图A.1根肿菌休眠孢子形态 A.2 发病症状 芸墓根肿菌主要危害十字花科植株根部，受侵染后，引起薄壁细胞的异常分裂增大，植株根部肿大形 成瘤状肿根，妨碍水分和营养物质的运输导致根和茎吸收传导养分受阻，生长不良，萎、矮化，产量和质 量受损，以致减产，严重的导致绝收，造成严重的经济损失（见图A.2）。 病株地上部症状表现为：发生初期植株生长缓慢、矮小，后期基部叶片变黄、萎焉呈失水状，严重时全 株枯死， 病株地下部症状表现为：主根、侧根和须根上长出大小不等的瘤状肿根，主根肿瘤大如鸡蛋，侧根肿瘤 很小，纺锤形、圆筒形、手指形，须根肿瘤成串。