ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3804—2020 油脂类饲料原料中不皂化物的测定 正已烷提取法 Determination of unsaponifiable matter in fats and oils forfeed materials-Method using n-hexane extraction (ISO 18609:2000,Animal and vegetablefats and oilsDetermination of unsaponifiablematter-Methodusinghexaneextraction,MOD) 2020-11-12 发布 2021-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3804—2020 V 前 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20000.212009给出的规测起草。 本标准使用重新起草法修改采用ISO18609:2000《动植物油皂化物测定已烷提取法》。 本标准与ISO18609：2000相比在结构上有较大调整，附录中列出了本标准与ISO18609：2000章 条编号对照一览表。 本标准与ISO18609：2000的技术性差异及其原因如下： 修改了ISO标准中前言部分的内容； 关于规范性引用文件，本标准作了具有技术性差异的调整，以适应我国的技术条件，调整的情况 集中反映在第2章“规范性引用文件”中，具体调整如下： ·用等同采用的GB/T15687代替了ISO661； ·增加引用了GB/T601和GB/T6682。 将不皂化物提取溶剂修改为正已烷； 删除了抽样的内容（见ISO18609：2000的第7章）； 在本标准8.1中，增加了皂化终点的要求和皂化后回流装置的清洗步骤，以保证试样皂化完全， 提高可操作性； 在本标准8.7中，修改了空白试验残留物限量的要求； 在本标准第10章中，增加了精密度要求，精密度反映了结果的离散程度，也是分析结果的可靠性 依据； 删除了试验报告的内容（见ISO18609：2000的第12章）。 本标准还作了下列编辑性修改： 将“本国际标准”修改为“本标准”； 根据我国饲料行业实际，将标准名修改为《油脂类饲料原料中不皂化物的测定 正已烷提取法》； 修改了ISO标准的适用范围的表述方式； 一删除了参考文献； 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。 本标准起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、通威股份有限公司。 本标准主要起草人：宋涛、张凤秤、卢加文、李灿英 I NY/T3804—2020 油脂类饲料原料中不皂化物的测定 正已烷提取法 1范围 本标准规定了油脂类饲料原料中不皂化物的测定方法。 本标准适用于油脂类饲料原料中不皂化物的测定。 警告：与ISO3596方法相比，本方法的测定结果系统性偏低 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是 ，仅注口期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文 所有的修改单成 GB/T601 化学 剂 标准尚定 GB/T 6682 析： 验室用水 格 方法 GB/T 15687 直物润脂 动 试样的 3术语和定义 S 下列术语和定 适用 文件 3. 1 A 不皂化物 mblematter 试样经氢 斤有剩余物。 类、脂肪族 以及经工烷提取、在103℃时不 注：不皂化物色 挥发的所有夕 来有机物如矿物油 CE 4原理 C 试样与氢氧化钾 乙醇济 厂进行皂化用正 化 夜中提 皂化物，蒸发溶 剂，并对残留物干燥后利 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分 析纯试剂 警告：正已烷对上呼吸道有刺激性，操作时需戴口罩，正已烷是高挥发可燃试剂，进入烘箱干燥前，确 保其挥发干。 5.1水：GB/T6682，三级 5.2正已烷：溴价低于1，且不得含有蒸发残渣。 5.395%乙醇。 5.4乙醇。 5.5氯化钠。 5.6乙醇-水溶液（10+90)：量取10mL乙醇（5.4)，用水稀释至100mL，混匀。 5.7酚酞指示剂（10g/L）：称取1g酚酞，用95%乙醇（5.3)溶解并稀释至100mL，混匀。 5.8氢氧化钾-乙醇溶液：称取60g氢氧化钾溶于50mL水中，充分混匀，然后用95%乙醇（5.3)稀释至 1000mL，混匀。此溶液呈无色或浅黄色。 5.9氢氧化钾-乙醇标准溶液[c（KOH)=0.1mol/L]：称取约500g氢氧化钾，置于烧杯中，加约420mL 水溶解，冷却，移入聚乙烯容器中，放置。用塑料管量取7mL上层清液，用95%乙醇（5.3）稀释至 1 NY/T3804—2020 1000mL，密闭避光放置2d～4d至溶液清亮后，用塑料管虹吸上层清液至另一聚乙烯容器中（避光保存 或用深色聚乙烯容器），按照GB/T601标定。 5.10乙醇溶液：取500mL乙醇（5.4)，使用前滴加3滴～4滴酚酞指示剂（5.7），预先用0.1mol/L氢氧 化钾-乙醇标准溶液（5.9)中和至酚酞指示剂呈粉红色 5.11玻璃珠。 6仪器设备 6.1分析天平：感量0.01g和0.0001g。 6.2圆底烧瓶：带标准磨口的250mL圆底烧瓶。 6.3回流冷凝管：具有与250mL圆底烧瓶（6.2)配套的磨口。 6.4分液漏斗：250mL，具有聚四氟乙烯旋塞和瓶塞。 6.5恒温水浴。 6.6电热恒温干燥箱：温度能保持在(103土2)℃。 6.7旋转蒸发仪。 7样品 按照GB/T15687制备试样，取200mL，混合均匀，装人密闭容器中，备用。 8试验步骤 8.1皂化 平行做2份试验。准确称取约5g（精确至0.01g）试样于250mL圆底烧瓶中（6.2)，加入50mL氢 氧化钾-乙醇溶液（5.8）、6粒～8粒玻璃珠，连接回流冷凝管（6.3），煮沸回流1h，停止加热。如溶液不透 明，则需继续回流至溶液透明为止。于回流冷凝管顶部加人2mL95%乙醇（5.3）、50mL水冲洗冷凝管， 旋转摇匀。 8.2不皂化物的提取 冷却后，将皂化液全部转移到250mL分液漏斗（6.4)中，用50mL正已烷（5.2)分3次洗涤烧瓶和玻 璃珠，洗涤液并入分液漏斗中。盖好分液漏斗旋塞，用力振荡1min，倒转分液漏斗，小心打开旋塞，间歇 地释放内压。静置分层后，将下层皂化液放人第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，可加人适量乙醇 (5.4)或氢氧化钾-乙醇溶液（5.8)或2g～3g氯化钠（5.5)破乳。用相同方法，50mL正已烷（5.2)对皂化 液重复提取2次。3次正已烷提取液收集到同一分液漏斗中。 8.3正已烷提取物的洗涤 向不皂化物提取液中加入25mL乙醇-水溶液（5.6），盖好分液漏斗旋塞，剧烈振荡，洗涤提取液，弃 去乙醇-水溶液层，每次弃去洗涤液后，保持分液漏斗中剩余约2mL洗涤液，重复3次。将分液漏斗沿其 轴线旋转，静置5min，使剩余的乙醇-水溶液相进一步分离，弃去，在最后弃去的乙醇-水溶液洗涤液中加 人1滴酚酥指示剂（5.7），如果溶液呈粉红色时，继续用乙醇-水溶液（5.6)洗涤，直至溶液不出现粉红色时 为止。 8.4蒸发溶剂 通过分液漏斗上口小心把正已烷提取液转移到预先经（103土2)℃干燥至恒重并准确称量至0.1mg 的250mL圆底烧瓶（6.2)中，用旋转蒸发仪蒸发、回收溶剂。 8.5残留物的干燥和测定 将圆底烧瓶水平放置在（103土2)℃烘箱中，干燥残留物15min。取出圆底烧瓶，立即放置于干燥器 中冷却30min，称量，结果精确至0.1mg。重复干燥，直至2次称量的质量差不超过1.5mg。如果连续3 次干燥后还不能恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。 2 NY/T3804—2020 8.6游离脂肪酸校正 将称量后的圆底烧瓶中加入4mL正已烷（5.2），溶解不皂化物，再加入20mL乙醇溶液（5.10），混 勾，用0.1mol/L氢氧化钾-乙醇标准溶液(5.9)滴定至粉红色终点。记录氢氧化钾-乙醇标准溶液的消耗 量，以油酸计算游离脂肪酸的含量，并以此校正残留物的质量。 8.7空白试验 不加试样，按上述步骤进行空白试验，如残留物超过2.6mg，需检查测定过程和试剂，重新进行测定。 9试验数据处理 试样中不皂化物的含量以质量分数计，数值以质量分数（%）表示，按式（1)计算。 =02 m X100 (1) m 式中： mi 残留物的质量，单位为克（g)； m2 游离脂肪酸的质量，单位为克（g）； m3 空白的残留物质量，单位为克（g）； m 试样的质量，单位为克（g）。 按式(2)计算校准残留物质量以得到的游离脂肪酸含量。 m2=0.28XVXc (2) 式中： V 滴定消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液体积，单位为毫升（mL）； c 氢氧化钾-乙醇标准溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L)； 0.28— 油酸分子量/1000。 测定结果以平行测定的算术平均值表示，表示至小数点后2位。 10 精密度 在重复性条件下，应符合下述规定： 当不皂化物含量≤1.00%时，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值 15%；当不皂化物含量>1.00%时，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值 10%。 附录B汇总了本方法精密度的实验室间测试情况。从这些测试中得到的值可能不适用于其他浓度 范围和测试对象。 3 NY/T3804—2020 附录A （资料性附录） 本标准与ISO18609:2000相比的结构变化情况 本标准与ISO18609：2000相比在结构上有调整，具体章