ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3801-2020 饲料原料中酸溶蛋白的测定 Determination of acid-soluble protein in feed materials 2020-11-12发布 2021-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3801—2020 前 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TCZO）归口。 本标准起草单位：山东新希望六和集团有限公司、中国饲料工业协会、广东省农业科学院农产品公共 监测中心。 本标准主要起草人：杨红伟、王黎文、郭吉原、罗福星、谢庚楠、王威利、周桂莲、隋莉、姜晓霞、郭团结、 刘璐、张敏、石琴琴。 NY/T3801—2020 饲料原料中酸溶蛋白的测定 1范围 本标准规定了饲料原料中酸溶蛋白的测定方法 凯氏定氮法和氨基酸分析法。 本标准适用于植物性和动物性饲料原料中酸溶蛋白含量的测定 2 规范性引用文件 PUBL 下列文件对于本文件 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用义 GB/T601 化 标作滴 制备 GB/T6432 饲料中粗金 可测定 凯氏定氮法 GB/T6682 实验圣用尿规格机 介村 武验方 GB/T1539 18c同 中含硫氨 酸的测 GB/T182 019 料中氨基酸的 GB/T201 动物饰 试样的制 JRA 3术语和定义 下列术语 和 3. 1 酸溶蛋白 1g植物性 4 样品 R 按照GB/T20195 制式 分析筛，充分混勾； 液态样品应混合均匀， 舒制备好的了 人密闭容器中备用。 5 凯氏定氮法 5.1原理 试样用三氯乙酸溶液提取，经离心后， 用凯氏定氮法测定提取液中粗蛋白质含量。 5.2试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 5.2.1水：GB/T6682,三级。 5.2.2硫酸。 5. 2. 3 三氯乙酸溶液（150g/L）：称取150g三氯乙酸，加水溶解并定容至1000mL，混匀。 5.2.4混合催化剂：称取0.4g五水硫酸铜和6.0g硫酸钾或硫酸钠，研磨混匀。 5.2.5滤纸：中速定性。 5.3仪器设备 5.3.1凯氏定氮仪或其他定氮装置。 5.3.2消化炉：控温范围280℃~420℃，控温精度土10℃。 NY/T3801—2020 5.3.3分析天平：感量1mg。 5.3.4回旋振荡器。 5.3.5磁力搅拌器。 5.3.6离心机：转速不低于4000r/min。 5.4试验步骤 5.4.1提取 平行做2份试验。称取试样5g，精确至1mg，置于250mL具塞三角瓶中。在10℃～35℃条件下， 准确加人100mL三氯乙酸溶液（5.2.3)（如样品形成小球或团块，需先均质后再振荡提取）。对于固态试 样，摇匀后，于150r/min振荡30min。对于液态、半固态或膏状试样，振摇后，置于磁力搅拌器上，150r/min 搅拌30min，然后静置5min。将上层溶液倒入100mL离心管中，4000r/min离心5min，上清液为试样 提取液。如上层溶液有漂浮物，需过滤。 5.4.2测定 5.4.2.1半微量法测定 准确移取10mL~50mL（含氮量14mg~80mg)试样提取液（5.4.1)于消化管中，加入6.4g混合催 化剂（5.2.4）和12mL硫酸（5.2.2），摇匀。置于消化炉上，于280℃将溶液浓缩至约20mL，再于420℃ 继续消化1.5h。取出，冷却至室温，加水30mL，摇匀。按照GB/T6432一2018中7.1.2～7.1.3的规定 进行氨的蒸馏和滴定操作。 5.4.2.2全量法测定 准确移取10mL~50mL含氮量14mg~80mg）试样提取液（5.4.1)于消化管中，加人6.4g混合催 化剂（5.2.4)和12mL硫酸（5.2.2），摇匀。置于消化炉上，于280℃将溶液浓缩至约20mL，再于420℃ 继续消化1.5h。取出，冷却至室温，加水30mL,摇匀。按照GB/T6432一2018中7.2.2～7.2.3的规定 进行氨的蒸馏和滴定操作。 5.4.3空白试验 空白试验应与测试平行进行，并采用相同的试验步骤，取相同量的所有试剂，但不加样品。 5.5试验数据处理 试样中酸溶蛋白含量以粗蛋白质的质量分数计，数值以质量分数（%）表示，按式（1)计算。 (V3-Vo) Xc× 14 1000 X6.25 1m V2 X100 (1) mXV 式中： Vi 试样提取时加入的三氯乙酸溶液体积，单位为毫升（mL）； V2 测定时移取的试样提取液体积，单位为毫升（mL）； V3 滴定时所消耗盐酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）； Vo 空白试验滴定时所消耗盐酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）； c 盐酸标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)； 试样质量，单位为克(g)； 14 氮的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)； 6.25 氮换算成粗蛋白质的平均系数。 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，计算结果表示到小数点后2位。 5.6精密度 在重复性条件下，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值，当含量不大于20%时，不大于该算 术平均值的5%；含量大于20%时，不大于该算术平均值的3%。 2 NY/T 3801—2020 6氨基酸分析法 6.1原理 试样用三氯乙酸溶液提取，离心后，提取液经氧化酸水解法和常规酸水解法处理，用三酮柱后衍生 离子色谱法分别测定含硫氨基酸和其他蛋白氨基酸含量，其加和即为样品中酸溶蛋白含量。 6.2试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 6.2.1水：GB/T6682，一级。 6.2.2盐酸：优级纯。 6.2.3过甲酸溶液：将过氧化氢+甲酸（浓度为88%）=1十9，混合，并按每毫升添加5mg比例加人苯 酚，于室温下放置1h，置冰水浴中冷却30min。临用现配。 6.3仪器设备 6.3.1氨基酸自动分析仪：具有阳离子交换柱、节三酮柱后衍生装置及570nm和440nm光度检测器。 6.3.2旋转蒸发器或浓缩器：可在室温至65℃之间调温，控温精度土1℃，真空度需低至3.3×103Pa。 6.3.3分析天平：感量1mg。 6.3.4回旋振荡器。 6.3.5磁力搅拌器。 6.3.6离心机：转速不低于4000r/min。 6.4试验步骤 6.4.1提取 同5.4.1。 6.4.2含硫氨基酸的测定 移取试样提取液（6.4.1)0.5mL~5mL（含蛋白7.5mg~25mg）于20mL试管中，在低于50℃和 3.3X103Pa（25mmHg）条件下，减压蒸至近干，于冰水浴中冷却30min后加入已冷却的过甲酸溶液 （6.2.3)2mL进行氧化，加液时需将样品全部润湿，但不要摇动，盖好瓶塞，连同冰浴一道置于0℃～4℃ 冰箱中，反应16h。之后按照GB/T15399—2018中7.1b)的规定，从“于样品氧化液中加人偏重亚硫酸 钠溶液0.5mL"开始操作，并按照GB/T15399—2018中7.2的规定进行测定。 6.4.3其他氨基酸的测定 移取试样提取液（6.4.1)0.5mL~5mL（含蛋白7.5mg~25mg）于20mL安瓶中，加适量水至溶 液总体积为5mL，再加人5mL盐酸（6.2.2)和10mg苯酚，摇匀溶解，按照GB/T18246—2019中3.5.1 的规定，从“置液氮中冷冻”开始，进行酸水解操作。并按照GB/T18246一2019中3.5.2的规定进行 测定。 6.5试验数据处理 试样中酸溶蛋白含量以氨基酸总量的质量分数w2计，数值以质量分数（%）表示，按式（2）和式（3） 计算。 w2=w2.1+w2.2+...+w2.k :(2) .(3) V2 AsiXmX XVs X103 式中： W2.i 试样溶液中氨基酸i的含量（i=1，，k）,单位为克每百克（g/100g)； A; 试样溶液中氨基酸i的峰面积； V 试样水解液体积，单位为毫升（mL）； 3 NY/T3801—2020 c 混合氨基酸标准工作液中各种氨基酸的浓度，单位为纳摩尔每毫升（nmol/mL)； V3 试样溶液进样体积，单位为微升（μL）； n 试样水解液稀释倍数； Vst 混合氨基酸标准工作溶液的进样体积，单位为微升（L)； Asi 混合氨基酸标准工作溶液中氨基酸讠的峰面积； M 氨基酸的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol)（胱氨酸实为胱氨酸与半胱氨酸之和，以胱氨酸 计，M胱氨酸=120.2；M蛋氨酸=149.2）。 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，计算结果表示到小数点后2位 6.6精密度 在重复性条件下，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值 ，当含量不大于20%时，不大于该算 术平均值的5%；含量大于20%时，不大于该算术平均值的3% UB 人 NY/T 3801-2020 中华人民 共 和国 农业行业标准 饲料原料中酸溶蛋白的测定 NY/T3801—2020 * * * 中国农业出版社出版 （北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行 各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2021年3月第1版 2021年3月北京第1次印刷 书号：16109：8443 定价：24.00元 版权专有 侵权必究 NY/T3801-2020 举报电话：（010）59194261