ICS 65.020.30 B 43 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3796—2020 马和驴冷冻精液 Frozen semen of horse and donkey 2020-11-12 发布 2021-04-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T3796—2020 业食 国浓 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274） 归口。 本标准起草单位：全国畜牧总站、山东省农业科学院、内蒙古自治区家畜改良工作站、南京农业大学 山东天龙驴产业研究院。 本标准主要起草人：刘丑生、孟飞、王长法、格力格桑、陆汉希、嵇传良、于杰、赵俊金、红海、朱芳贤、许 海涛、董红、曾维斌、韩旭、阿娜尔。 I NY/T3796—2020 马和驴冷冻精液 1范围 本标准规定了马和驴细管冷冻精液的术语和定义、技术要求、取样、试验方法、检验规则、标志、标签、 随行文件、包装、运输和储存 本标准适用于马和驴细管冷冻精液 规范性引用文件 下列文件对于本文件的 应用是 ，仅注 期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文 其 GB4143牛冷冻精液 GB/T 8170 值修 约规则与 GB/T30396 冻精液 3 术语和定义 S 下列术语利 适用 3. 1 A 数pro 前进运动精子 gressive motility 每剂量精液！ 呈前进 动的精子数 3. 2 精子活力 SDe erm otility 在37℃环境下 前进运 3.3 精子畸形率 abnormal 畸形精子占总精 3. 4 菌落数bacteriacount 每剂量精液经培养后 到的细菌 3.5 冷冻精液 frozen semen 用特殊方法处理，经超低温冷冻后在液氮中能长期保存的精液 注：改写GB4143—2008，定义3.5。 3.6 储精管goblet -端封闭另一端开口的柱形储存细管冷冻精液的器材。管体要求厚薄均勾一致，在常温至超低温 （一196℃)环境下不变形、不破裂。 ［GB/T30396—2013，定义3.5] 4技术要求 马和驴细管冷冻精液质量应符合表1的规定。 NY/T3796—2020 表 1 马和驴细管冷冻精液质量要求 项目 指标 外观 细管无裂痕、两端封口严密、所印字迹应清晰易认、信息齐全 微型 0.25 剂型，mL 中型 0.50 微型 ≥0. 18 剂量，ml 中型 ≥0.40 马 ≥>30 精子活力，% 驴 ≥35 微型 ≥1.35×107 前进运动精子数，个/剂 中型 ≥3.0X107 马 ≤25 精子畸形率，% 驴 ≤20 菌落数，个/剂 0001> 5取样 5.1取样原则 取样应遵循随机性、代表性的原则： a）按品种及公马或公驴号顺序排列，取样人员按样本数随机确定各样品公马或公驴； b）所有采精公马或公驴都纳入取样范围； c) 每头公马或公驴冷冻精液样品应是同一生产批次的产品。 5.2取样量 以每批次生产量随机抽取，每批次取样量不少于10%，对确定取样的公马或公驴，取样数量不得少于 16支/头。 5.3取样方法 5.3.1样品从冷冻精液储存容器中抽取，转移过程应操作熟练、快速，样品离开液氮低温环境不宜超过 3 s。 5.3.2 2取样完成后，应及时填写样品登记单（日期、取样地点、公马或公驴品种、身份号、样品生产日期或 批号及取样人签字)，并与样品随行。 6 试验方法 6.1外观 用目测法观察评定。 6.2剂型 用目测法观察评定。 6.3剂量 按照附录A中A.1规定的方法执行。 6.4解冻后精液质量 精子活力、前进运动精子数、精子畸形率、菌落数的检验按照A.2A.5规定的方法执行。 7检验规则 7.1检验分类 7.1.1出厂检验 检验项目为产品外观和精子活力。 7.1.2型式检验 2 NY/T3796—2020 检验项目为第4章规定的全部检验项目。产品正常生产时，至少每季度进行一次型式检验，但有下列 情况之一时，应进行型式检验： a） 生产工艺及设备有重大变更时； b）所用生产原料有重大变化时； c） 种马或种驴发生疾病或统一注射疫苗时； d）停产3个月以上恢复生产时； e） 出厂检测结果与上次型式检测结果有较大差异时； D1 监督管理部门提出要求时。 7.2判定 7.2.1样品判定规则 7.2.1.1所检项日全部符合全部符合表1中的规定要求时，则判定为该样品合格。 7.2.1.2所检项日中有任何一项未达到表1中的规定要求，备样复检后仍未达到时，则判定为该样品不 合格。 7.2.1.3各项目检测结果的极限数值判定按GB/T8170中修约值比较法执行。 7.2.2批次判定规则 合格。 8标志、标签和随行文件 8.1 细管标记 冷冻精液细管外壁应清楚标明生产站名、种公马或种公驴品种代码、个体号、生产日期或批次。种公 马和种公驴品种代码以畜禽遗传资源鉴定及审定部门公布的为准 8.2内标签 在储精管或灭菌纱布袋上标注种公马或种公驴品种代码、个体号和细管数量。 8.3外标签 在硬纸板或无纺布上标注种公马或种公驴品种代码、个体号、细管数量、包装日期、产品标准编号、生 产许可证号、生产者名称和地址及联系方式、储存方式和条件、使用说明等。 8.4随行文件 随行文件符合现行法律、法规，包括种公马或种公驴系谱、检疫证明、冷冻精液检验合格证明、生产经 营许可证等。 9包装、运输和储存 9.1包装 包装应在液氮或一140℃以下的环境中进行。将冷冻细管分类装入储精管，包装后的细管冷冻精液其 棉塞端应朝向储精管的底部，不得倒置。再用灭菌纱布袋将装有冷冻精液的储精管包装起来，一个灭菌纱 布袋一个个体，每一包装量不得超过100剂 9.2运输 运输过程中储存容器不得碰撞或剧烈震动。 9.3储存 马和驴冷冻精液应储存于装有液氮的容器。在由一个容器转移至另一个容器时，间隔时间不得超过 3s。 3 NY/T3796—2020 附录A （规范性附录） 马和驴冷冻精液质量检验方法 A.1剂量检测 A.1.1主要器材 小试管、剪刀、刻度吸管。 A.1.2检查方法 B 取2剂细管冷冻精液 1然解冻 小试管内，用1.0mL刻度吸管 准确吸取精液，并读取精 液总士 A.1.3计算 样品的剂量值 均值，按式（A. .......... (A.. ) 式中： TA V 剂量 n 2剂样品 总剂土值 单位 URA A.2精子活力检测 A.2.1主要器材 卡质出 相差显微镜 水浴 mL试管 盖玻片、显微 镜恒温装置、移 CEI A.2.2检测及 A.2.2.1显微镜目测评估法（仲裁 取2剂细管冷 清液分 温水浴锅中解冻.取山细管并 用吸水 纸擦干水珠，剪去超 声波封口端，用细管 内混匀，用移液器取混合精 10L置于载玻片 上，加盖玻片后立即在 406 相差显德 微镜下观察市 温度应保特 每样品制作两个 样片，每一样片观察盖玻 央区域至 见野彩 全评价值 精子活力是第一样片精子活力综合评价值和第 手活力综合评 价值的平均数，按式（A.2） 计算。 M=(ni +n2)/2 (A.2) 式中： M 精子活力，单位为百分号（%）； n, 第一样片活力综合评价值，单位为百分号（%）； n, 第二样片活力综合评价值，单位为百分号（%）。 A. 2. 2.2 2计算机辅助分析法(CASA) 取2剂细管冷冻精液分别直接置于37℃恒温水浴箱中解冻，取解冻后混合精液10μL置于专用载玻 片边缘，使精液自行流入分析室。应用精子质量自动分析系统测定，精子活力为快速前进运动精子的 比例。 A.3每剂量前进运动精子数检测 A.3.1主要器材 4 NY/T3796—2020 血细胞计数板、血盖片、移液器、试管、计数器、生物显微镜或电视显微系统等。 A.3.2检测方法 用移液器准确吸取10μL解冻精液，注入盛有0.99mL3.0%氯化钠溶液的试管内，混匀，使之成为 100倍稀释的稀释精液。将备好的血细胞计数板用血盖片将计数室盖好，用移液器吸取稀释精液于血盖 片边缘，使稀释精液自行流入计数室，均匀充满，用同样方法为另一端计数室加样。静置5min后在生物 显微镜下或电视显微系统上观察计数。上、下两个计数室各5个中方格的精子数，取平均值。 A.3.3计算 A.3.3.1每剂量中精子总数计算 每剂量中精子总数按式（A.3)计算。 S=QX5X105×V (A.3) 式中： S——每剂量中精子总数，单位为个； Q一一计数室5个方格中的精子数，单位为个； V一一剂量值，单位为毫升（mL）。 每样品观察上、下两个计数室，取平均值，如两个计数室计数结果误差超过5%，则应重检。 A.3.3.2每剂量前进运动精子数计算 每剂量前进运动精子数按式（A.4)计算。 C=SXM (A.4) 式中： C——每剂量中前进运动精子数，单位为个； S——每剂量中精子总数，单位为个； M一—精子活力，单位为百分号（%）。 A.4精子畸形率的检测 A.4.1主要器材 生物显微镜、移液器、载玻片、血细胞分类计数器、染色板 A.4.2主要试剂及配制 A.4.2.1磷酸盐缓冲液 称取磷酸二氢钠（NaH2PO·2H2O)0.55g、磷酸氢二钠（NazHPO·12HzO)2.25g，蒸馏水定容至 100mL。 A.4.2.2中性福尔马林固定液 取磷酸二氢钠（NaHzPO,·2H2O)0.55g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O)2.25g，用0.89%氯化钠 约50.0mL溶解后加入8.0mL40%甲醛HCHO使用前经碳酸镁中和过滤），再加0.89%氯化钠溶液定 容至100.0mL。 A.4.2