书 书 书犐犆犛 １３ ． ３１０ 犃 ９２ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １９２６７ ． ３ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７．３ — ２００３ 刑事技术微量物证的理化检验 第 ３ 部分 ： 分子荧光光谱法 犘犺狔狊犻犮犪犾犪狀犱犮犺犲犿犻犮犪犾犲狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋狉犪犮犲犲狏犻犱犲狀犮犲犻狀犳狅狉犲狀狊犻犮狊犮犻犲狀犮犲狊 — 犘犪狉狋 ３ ： 犕狅犾犲犮狌犾犪狉犳犾狌狅狉狅狊狆犲犮狋狉狅犿犲狋狉狔 ２００８  ０８  １４ 发布 ２００９  ０３  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７ 《 刑事技术微量物证的理化检验 》 分为 １２ 个部分 ： ——— 第 １ 部分 ： 红外吸收光谱法 ； ——— 第 ２ 部分 ： 紫外  可见吸收光谱法 ； ——— 第 ３ 部分 ： 分子荧光光谱法 ； ——— 第 ４ 部分 ： 原子发射光谱法 ； ——— 第 ５ 部分 ： 原子吸收光谱法 ； ——— 第 ６ 部分 ： 扫描电子显微镜 ／ Ｘ 射线能谱法 ； ——— 第 ７ 部分 ： 气相色谱  质谱法 ； ——— 第 ８ 部分 ： 显微分光光度法 ； ——— 第 ９ 部分 ： 薄层色谱法 ； ——— 第 １０ 部分 ： 气相色谱法 ； ——— 第 １１ 部分 ： 高效液相色谱法 ； ——— 第 １２ 部分 ： 热分析法 。 本部分为 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７ 的第 ３ 部分 。 本部分代替 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７．３ — ２００３ 《 刑事技术微量物证的理化检验 　 第 ３ 部分 ： 分子荧光光谱法 》。 本部分与 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７．３ — ２００３ 相比主要变化有 ： ——— 增删了术语和定义的内容 （ 本部分的 ３．２ ～ ３．５ 、 ３．１０ ， ＧＢ ／ Ｔ１９２６７．３－２００３ 的 ３．２ ）； ——— 修改了关于仪器的内容 （ 本部分的 ５．２．１ ～ ５．３．３ ）； ——— 增加了实例的内容 （ 本部分的 ６．３．３ ）。 本部分由中华人民共和国公安部提出 。 本部分由全国刑事技术标准化技术委员会理化检验标准化分技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１７９ ／ ＳＣ４ ） 归口 。 本部分起草单位 ： 中国刑事警察学院 。 本部分主要起草人 ： 张振宇 。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１９２６７．３ — ２００３ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １９２６７ ． ３ — ２００８ 刑事技术微量物证的理化检验 第 ３ 部分 ： 分子荧光光谱法 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７ 的本部分规定了分子荧光光谱法的检验方法 。 本部分适用于刑事技术领域中微量物证的理化检验 ， 其他领域可参照使用 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７ 的本部分的引用而成为本部分的条款 。 凡是注日期的引用文 件 ， 其随后所有的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本部分 ， 然而 ， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本 部分 。 ＧＢ ／ Ｔ１３９６６ 　 分析仪器术语 ＧＢ ／ Ｔ１９２６７．２ — ２００８ 　 刑事技术微量物证的理化检验 　 第 ２ 部分 ： 紫外  可见吸收光谱法 ３ 　 术语和定义 ＧＢ ／ Ｔ１３９６６ 中确立的以及下列术语和定义适用于本部分 。 ３ ． １ 荧光 　 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲 分子 （ 也可以是原子或离子 ） 吸收能量跃迁至某电子激发单重态 ， 后又回到总自旋量子数不变的基 态时所发出的电磁辐射 。 ３ ． ２ 荧光激发光谱 　 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犲狓犮犻狋犪狋犻狅狀狊狆犲犮狋狉狌犿 在固定发射波长条件下 ， 荧光强度随激发波长变化的曲线 。 ３ ． ３ 荧光发射光谱 　 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犲犿犻狊狊犻狅狀狊狆犲犮狋狉狌犿 在固定激发波长条件下 ， 荧光强度随发射波长变化的曲线 。 通常意义上的荧光光谱即指荧光发射 光谱 。 ３ ． ４ 激发波长 　 犲狓犮犻狋犪狋犻狅狀狑犪狏犲犾犲狀犵狋犺 激发样品使其产生荧光的入射光波长 ， 用 λ ｅｘ 表示 。 ３ ． ５ 发射波长 　 犲犿犻狊狊犻狅狀狑犪狏犲犾犲狀犵狋犺 物质所发射的荧光的波长 ， 同时也是检测样品荧光时所采用的测定波长 ， 用 λ ｅｍ 表示 。 ３ ． ６ 斯托克斯位移 　 狊狋狅犮犽犲狊狊犺犻犳狋 物质的发射波长与激发波长的差值 （ 物质的发射波长总是大于激发波长 ）。 ３ ． ７ 荧光光谱法 　 犳犾狌狅狉狅狊狆犲犮狋狉狅犿犲狋狉狔 １ 犌犅 ／ 犜 １９２６７ ． ３ — ２００８ 根据获得的荧光激发光谱 、 发射光谱等参数对物质进行定性 、 定量和结构分析的方法 。 ３ ． ８ 同步扫描光谱 　 狊狔狀犮犺狉狅狊犮犪狀狊狆犲犮狋狉狌犿 保持激发波长与发射波长的某种关系 ， 同时扫描激发波长和发射波长所得到的物质的荧光光谱 。 根据激发波长与发射波长在扫描过程中彼此所保持的关系种类 ， 同步扫描光谱分为固定波长差 、 固定能 量差和可变波长三种类型 ， 其中最基本的是固定波长差的同步扫描荧光光谱 。 ３ ． ９ 荧光强度 　 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犻狀狋犲狀狊犻狋狔 物质发射荧光的相对强度 ， 用符号 犐 表示 。 它与仪器性能 、 激发光强度 、 溶液浓度及荧光物质的量 子产率等因素有关 ， 其关系为 ： 犐 ＝ 犓 Φ ｆ 犐 ｅ （ １ － ｅ － ε 犫犮 ） 　　 式中 ： 犐 ——— 荧光强度 ； 犓 ——— 常数 ； Φ ｆ ——— 量子产率 ； 犐 ｅ ——— 激发光强度 ； ε ——— 摩尔吸光系数 ； 犫 ——— 光路长度 ； 犮 ——— 溶液浓度 。 ３ ． １０ 导数荧光光谱 　 犱犲狉犻狏犪狋犻狏犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲狊狆犲犮狋狉狌犿 荧光强度对波长的一阶或高阶导数随波长变化的曲线 。 如以荧光强度 （ 犐 ） 随波长 （ λ ） 改变的速率 ｄ 犐 ／ ｄ λ 为纵坐标 ， 波长 λ 为横坐标所记录的荧光光谱 ， 即为一阶导数荧光光谱 ， 以此类推 ， 纵坐标为 ｄ ２ 犐 ／ ｄ λ ２ 时 ， 即为二阶导数荧光光谱 。 一定条件下 ， 荧光强度对波长的导数值与分析物的浓度成正比 。 ３ ． １１ 三维荧光光谱 　 狋犺狉犲犲犱犻犿犲狀狊犻狅狀犪犾犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲狊狆犲犮狋狉狌犿 描述荧光强度同时随激发波长和发射波长变化关系的图谱 。 ３ ． １２ 时间分辨荧光光谱 　 狋犻犿犲狉犲狊狅犾狏犲犱犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲狊狆犲犮狋狉狌犿 同时固定激发波长和发射波长的条件下 ， 荧光强度随时间变化的曲线 。 ３ ． １３ 荧光寿命 　 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犾犻犳犲狋犻犿犲 停止激发后 ， 荧光强度降到激发时的最大荧光强度的 １ ／ ｅ 所用的时间 ， 用 τ 表示 。 ３ ． １４ 荧光猝灭 　 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲狇狌犲狀犮犺犻狀犵 荧光物质分子与溶剂或溶质分子发生作用导致物质荧光强度下降的现象 。 ３ ． １５ 荧光效率 　 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犲犳犳犻犮犻犲狀犮狔 ； 犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲狔犻犲犾犱 荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值 ， 也称荧光产率 。 ３ ． １６ 瑞利散射 　 狉犪狔犾犲犻犵犺狊犮犪狋狋犲狉犻狀犵 激发光的光子与作为散射中心的分子相互作用时 ， 所发生的散射光频率与激发光频率相同的散射 。 ２ 犌犅 ／ 犜 １９２６７ ． ３ — ２００８ ３ ． １７ 拉曼散射 　 狉犪犿犪狀狊犮犪狋狋犲狉犻狀犵 激发光的光子与作为散射中心的分子相互作用时 ， 所发生的散射光频率与激发光频率不同的散射 。 拉曼散射光的波长通常要比激发光的波长长一些 ， 且随激发波长的改变而改变 。 ４ 　 原理 分子吸收紫外或可见光后 ， 基态分子跃迁到各个不同振动能级的单重态电子激发态 ， 再经振动驰豫 和 （ 或 ） 内转换衰变到单重态第一电子激发态的最低振动能级 ， 然后再跃迁到基态的各个不同振动能级 ， 从而发射出荧光 。 由于不同物质的分子结构不同 ， 或同一物质的溶液的浓度不同 ， 所吸收光及发射荧光 的波长和强度不同 ， 据此可进行荧光物质的定性和定量分析 。 ５ 　 仪器 ５ ． １ 　 仪器名称 荧光分光光度计 。 ５ ． ２ 　 仪器组成 ５ ． ２ ． １ 　 激发光源 荧光分光光度计的光源早期使用的主要是汞灯 ， 目前使用最广泛的是高压氙灯 。 高压氙灯属于短 弧气体放电灯 ， 在 ２５０ｎｍ ～ ８００ｎｍ 光谱区呈连续光谱 ， 外套为石英 ， 内充氙气 ， 室温时压力为 ５ａｔｍ （ 非 法定单位 ， １ａｔｍ＝１．０１３２５×１０ ５ Ｐａ ）， 工作时压力约为 ２０ａｔｍ 。 高压氙灯无论在平时或工作时都处于 高压之下 ， 存在爆裂危险 ， 安装时要小心 ， 应戴上安全眼睛 ， 防止意外 。 ５ ． ２ ． ２ 　 单色器 单色器是一种能把复合光分解为单色光并能从中选出所需波长的装置 。 荧光分光光度计中使用最 多的是光栅单色器 。 荧光分光光度计需要两个单色器 ： 激发单色器和发射单色器 。 为了避免激发光导 致的瑞利散射的影响 ， 一般激发单色器所在的激发光路和发射单色器所在的发射光路以样品池为中心 互成直角 。 ５ ． ２