书 书 书犐犆犛 １１ ． ２２０ 犅 ４１ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ９ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．８ — １９９９ 犛犘犉 鸡 　 微生物学监测 第 ９ 部分 ： 犛犘犉 鸡 　 试管凝集试验 犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀 — 犕犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狊狌狉狏犲犻犾犾犪狀犮犲 — 犘犪狉狋 ９ ： 犜狌犫犲犪犵犵犾狌狋犻狀犪狋犻狅狀狋犲狊狋犳狅狉犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀 ２００８  １２  ３１ 发布 ２００９  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９ 《 ＳＰＦ 鸡 　 微生物学监测 》 分为 １０ 个部分 ： ——— 第 １ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 微生物学监测总则 ； ——— 第 ２ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 红细胞凝集抑制试验 ； ——— 第 ３ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 血清中和试验 ； ——— 第 ４ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 血清平板凝集试验 ； ——— 第 ５ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 琼脂扩散试验 ； ——— 第 ６ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 酶联免疫吸附试验 ； ——— 第 ７ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 胚敏感试验 ； ——— 第 ８ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 鸡白痢沙门氏菌检验 ； ——— 第 ９ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 试管凝集试验 ； ——— 第 １０ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 间接免疫荧光试验 。 本部分为 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９ 的第 ９ 部分 。 本部分代替 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．８ — １９９９ 《 ＳＰＦ 鸡 　 试管凝集试验 》。 本部分与 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．８ — １９９９ 相比主要变化如下 ： ——— 增加了附录 Ａ “ 试剂的配制 ”； ——— 修改了凝集试验结果的判定 ； ——— 删除了鸡伤寒沙门氏菌检测内容 ； ——— 在范围中进一步明确了本部分使用的情况 。 本部分的附录 Ａ 为规范性附录 。 本部分由中华人民共和国农业部提出 。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１８１ ） 归口 。 本部分起草单位 ： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 、 中国动物卫生与流行病学中心 、 济南斯帕法 斯家禽有限公司 。 本部分主要起草人 ： 曲连东 、 姜骞 、 韩凌霞 、 邵卫星 、 朱果 、 单忠芳 、 刘家森 、 司昌德 、 郭东春 、 于海波 、 孟庆文 。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．８ — １９９９ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ９ — ２００８ 犛犘犉 鸡 　 微生物学监测 第 ９ 部分 ： 犛犘犉 鸡 　 试管凝集试验 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９ 的本部分规定了试管凝集试验的技术要求 。 本部分适用于对 ＳＰＦ 鸡进行鸡白痢沙门氏菌血清抗体检测 。 用血清平板凝集试验进行鸡白痢沙门氏菌的抗体检测 ， 结果难以判断时 ， 可采用本部分进行复检 。 ２ 　 原理 细菌性抗原与相应的抗体结合后 ， 在适量电解质参与下 ， 经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象 ， 结果判定以凝集价表示 。 ３ 　 试剂和器材 ３ ． １ 　 试剂 鸡白痢抗原 （ 含菌 １０ ９ ＣＦＵ ）， 标准阳性 、 阴性血清 ， 被检血清 ， ０．５％ 石炭酸生理盐水 （ 配制方法见 附录 Ａ ）。 ３ ． ２ 　 器材 试管 （ 口径 ８ｍｍ ～ １０ｍｍ ）。 ４ 　 操作程序 ４ ． １ 　 取 ５ 支试管 ， 第 １ 管加石炭酸生理盐水 １．８ｍＬ ， 其余各管加 １ｍＬ ， 第 １ 管加被检血清 ０．２ｍＬ ， 与 石炭酸生理盐水混匀 （ １∶１０ 稀释 ）， 取 １ｍＬ 移至第 ２ 管 ， 连续倍比稀释至第 ４ 管 ， 从第 ４ 管吸出 １ｍＬ 弃去 ， 各管血清最后稀释度依次为 １∶２０ ， １∶４０ ， １∶８０ ， １∶１６０ ， １∶３２０ 。 ４ ． ２ 　 每管加入抗原液 １ｍＬ 。 ４ ． ３ 　 抗原对照 ： 在试管中加抗原液 １ｍＬ ， 加 ０．５％ 石炭酸生理盐水 １ｍＬ 。 ４ ． ４ 　 阳性血清对照 ： 将阳性血清稀释至工作浓度 （ 按说明使用 ）。 在试管中加抗原液 １ｍＬ ， 加稀释的阳 性血清 １ｍＬ 。 ４ ． ５ 　 阴性血清对照 ： 同阳性血清稀释度使用 。 ４ ． ６ 　 试管振荡后 ， 置 ３７℃ 温箱中孵育 ， ２４ｈ 后移入 ４℃ ～ ８℃ 冰箱过夜 。 ４ ． ７ 　 结果观察 ： 抗原对照结果与阴性血清对照 ， 均呈 “ － ”， 阳性血清对照呈不同程度凝集 ， 表明试验成立 。 凝集结果判定见表 １ 。 凝集效价以呈现 “ ＋＋ ” 凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价 。 表 １ 　 凝集试验结果判定 类别 试管所见 结果 判定 １ 出现大的凝集块 ， 上层液体完全透明 ＋＋＋＋ ２ 出现明显凝集块 ， 上层液透明度达 ７５％ ＋＋＋ ３ 出现可见的凝集颗粒 ， 上层液透明度达 ５０％ ＋＋ 阳性 ４ 出现轻微可见的凝集颗粒 ， 上层液透明度达 ２５％ ± 可疑 ５ 无凝集块 ， 液体均匀混浊 － 阴性 １ 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ９ — ２００８ ５ 　 结果判定 ５ ． １ 　 阳性 ： 凝集效价 ≥ １∶８０ 。 ５ ． ２ 　 阴性 ： 凝集效价 ≤ １∶２０ 。 ５ ． ３ 　 可疑 ： 凝集效价 ＝１∶４０ ； 判为可疑的需要复检 ， 复检仍为可疑的样品判为阳性 。 ２ 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ９ — ２００８ 附 　 录 　 犃 （ 规范性附录 ） 试剂的配制 犃 ． １ 　 ０ ． ５ ％ 石炭酸生理盐水 石炭酸 ： ５ｇ ； 氯化钠 ： ８．５ｇ ； 蒸馏水 ： １０００ｍＬ ； 混合溶化 ， ６．８９７Ｐａ 、 ２０ｍｉｎ 消毒备用 。 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ９ — ２００８ 书 书 书 ８００２ — ９  ９９９７１ 犜 ／ 犅犌 中华人民共和国 国家标准 犛犘犉 鸡 　 微生物学监测 第 ９ 部分 ： 犛犘犉 鸡 　 试管凝集试验 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．９ — ２００８  中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街 １６ 号 邮政编码 ： １０００４５ 网址 ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ 电话 ： ６８５２３９４６ 　 ６８５１７５４８ 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销  开本 ８８０×１２３０１ ／ １６ 　 印张 ０．５ 　 字数 ６ 千字 ２００９ 年 ４ 月第一版 　 ２００９ 年 ４ 月第一次印刷  书号 ： １５５０６６ · １３６４２６ 如有印装差错 　 由本社发行中心调换 版权专有 　 侵权必究 举报电话 ：（ ０１０ ） ６８５３３５３３