书 书 书犐犆犛 １１ ． ２２０ 犅 ４１ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ４ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．３ — １９９９ 犛犘犉 鸡 　 微生物学监测 第 ４ 部分 ： 犛犘犉 鸡 　 血清平板凝集试验 犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀 — 犕犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狊狌狉狏犲犻犾犾犪狀犮犲 — 犘犪狉狋 ４ ： 犛犲狉狌犿狆犾犪狋犲犪犵犵犾狌狋犻狀犪狋犻狅狀狋犲狊狋犳狅狉犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀 ２００８  １２  ３１ 发布 ２００９  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９ 《 ＳＰＦ 鸡 　 微生物学监测 》 分为 １０ 个部分 ： ——— 第 １ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 微生物学监测总则 ； ——— 第 ２ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 红细胞凝集抑制试验 ； ——— 第 ３ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 血清中和试验 ； ——— 第 ４ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 血清平板凝集试验 ； ——— 第 ５ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 琼脂扩散试验 ； ——— 第 ６ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 酶联免疫吸附试验 ； ——— 第 ７ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 胚敏感试验 ； ——— 第 ８ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 鸡白痢沙门氏菌检验 ； ——— 第 ９ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 试管凝集试验 ； ——— 第 １０ 部分 ： ＳＰＦ 鸡 　 间接免疫荧光试验 。 本部分为 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９ 的第 ４ 部分 。 本部分修订参照了 ＮＹ ／ Ｔ５５３ — ２００２ 《 禽支原体病诊断技术 》 和 ＮＹ ／ Ｔ５３６ — ２００２ 《 鸡伤寒和鸡白痢 诊断技术 》 中的有关规定 。 本部分代替 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．３ — １９９９ 《 ＳＰＦ 鸡 　 血清平板凝集试验 》。 本部分与 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．３ — １９９９ 相比主要变化如下 ： ——— 增加了生理盐水作为阴性对照 。 本部分由中华人民共和国农业部提出 。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１８１ ） 归口 。 本部分起草单位 ： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 、 中国动物卫生与流行病学中心 、 济南斯帕法 斯家禽有限公司 。 本部分主要起草人 ： 曲连东 、 姜骞 、 韩凌霞 、 邵卫星 、 朱果 、 单忠芳 、 刘家森 、 司昌德 、 郭东春 、 于海波 、 孟庆文 。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．３ — １９９９ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ４ — ２００８ 犛犘犉 鸡 　 微生物学监测 第 ４ 部分 ： 犛犘犉 鸡 　 血清平板凝集试验 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９ 的本部分规定了鸡血清平板凝集试验的技术要求 。 本部分适用于对 ＳＰＦ 鸡进行以下病原微生物的血清抗体检测 ： 鸡白痢沙门氏菌 （ 犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪 狆狌犾犾狅狉狌犿 ）、 鸡毒支原体 （ 犕狔犮狅狆犾犪狊犿犪犵犪犾犾犻狊犲狆狋犻犮狌犿 ）、 滑液囊支原体 （ 犕狔犮狅狆犾犪狊犿犪狊狔狀狅狏犻犪犲 ）、 副鸡嗜 血杆菌 （ 犎犪犲犿狅狆犺犻犾狌狊狆犪狉犪犵犪狌犻狀犪狉狌犿 ）。 ２ 　 原理 血清平板凝集试验是细菌性抗原与相应的抗体结合后 ， 在适量的电解质参与下 ， 经过一段时间出现 肉眼可见的凝集现象 ， 常采用已知的标准细菌性抗原液检测相应的凝集抗体 。 ３ 　 试剂和材料 ３ ． １ 　 试剂 ３ ． １ ． １ 　 凝集抗原 。 ３ ． １ ． ２ 　 阴性血清 、 阳性血清 。 ３ ． １ ． ３ 　 被检血清 。 ３ ． ２ 　 材料 玻璃板 ， 移液器 （ ＴＤ１０ μ Ｌ ～ ２００ μ Ｌ ） 及吸头 。 ４ 　 操作程序 ４ ． １ 　 使用前 １０ｍｉｎ ～ ２０ｍｉｎ 自冰箱取出抗原 、 阴性标准血清 、 阳性标准血清及被检血清 ， 使其达到 室温 。 ４ ． ２ 　 用移液器吸取充分混匀的诊断抗原一滴 （ ０．０２５ｍＬ ～ ０．０５ｍＬ ）， 垂直滴于玻璃板上 ， 然后迅速在 抗原旁边滴加同量的被检血清一滴 （ ０．０２５ｍＬ ～ ０．０５ｍＬ ）。 ４ ． ３ 　 用牙签使血清与抗原混合均匀 ， 涂布成直径为 １ｃｍ ～ ２ｃｍ 的片状 ， 不断摇动玻璃板 ， ２ｍｉｎ 内观 察结果 。 ４ ． ４ 　 试验应在 ２０℃ ～ ２５℃ 条件下进行 。 ４ ． ５ 　 每批试验应设阳性血清 、 阴性血清及生理盐水对照 。 ５ 　 结果判定 在 ２ｍｉｎ 内出现 ５０％ （ ＋＋ ） 以上凝集者为阳性 。 ２ｍｉｎ 内不凝集 （ － ） 者为阴性 ， 介于上述两者之 间为可疑 ， 进行复核试验 ， 如仍为可疑 ， 判为阳性 。 凝集判读标准见表 １ 。 １ 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ４ — ２００８ 表 １ 　 血清平板凝集试验结果 类 　 别 平板所见 结 　　 果 判 　　 定 １ 　 出现大的凝集块 ， 底质清亮 ， 即 １００％ 凝集 ＋＋＋＋ ２ 　 出现明显凝集块 ， 底质稍有浑浊 ， 即 ７５％ 凝集 ＋＋＋ ３ 　 出现可见的凝集颗粒 ， 底质混浊 ， 即 ５０％ 凝集 ＋＋ 阳性 ４ 　 出现轻微可见的凝集颗粒 ， 底质极混浊 ， 即 ２５％ 凝集 ± 可疑 ５ 　 底质均匀一致极浑浊 ， 无凝集现象 ， 即不凝集 － 阴性 ２ 犌犅 ／ 犜 １７９９９ ． ４ — ２００８ 书 书 书 ８００２ — ４  ９９９７１ 犜 ／ 犅犌 中华人民共和国 国家标准 犛犘犉 鸡 　 微生物学监测 第 ４ 部分 ： 犛犘犉 鸡 　 血清平板凝集试验 ＧＢ ／ Ｔ１７９９９．４ — ２００８  中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街 １６ 号 邮政编码 ： １０００４５ 网址 ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ 电话 ： ６８５２３９４６ 　 ６８５１７５４８ 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销  开本 ８８０×１２３０１ ／ １６ 　 印张 ０．５ 　 字数 ５ 千字 ２００９ 年 ４ 月第一版 　 ２００９ 年 ４ 月第一次印刷  书号 ： １５５０６６ · １３６４２３ 如有印装差错 　 由本社发行中心调换 版权专有 　 侵权必究 举报电话 ：（ ０１０ ） ６８５３３５３３