ICS65.020.01 CCSB38DB61 陕西省地方标准 DB61/T1517—2021 灵芝固体菌种生产技术规范 TechnicalspecificationforproductionofGanodermalucidumsolidspawn 2021-12-17发布 2022-01-17实施 陕西省市场监督管理局 发布 DB61/T1517-2021 I目  次 前言.....................................................................................................................................................................II 1范围.................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.............................................................................................................................................1 3术语和定义.....................................................................................................................................................1 4生产条件.........................................................................................................................................................2 5生产工艺.........................................................................................................................................................2 6菌种生产档案.................................................................................................................................................4 附录A（规范性）常用培养基及其配方........................................................................................................5 附录B（规范性）常用原种和栽培种培养基及其配方...............................................................................6 参考文献...............................................................................................................................................................7 DB61/T1517-2021 II前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件由陕西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：陕西省微生物研究所、柞水县科技开发中心、宁强县真菌研究所、陕西中科菌业 科技有限公司。 本文件主要起草人：李峻志、戴璐、霍文严、乔婷、祁鹏、张黎光、刘愚、路鹏鹏、贺雪莲、张怀 荣、陆博、李安利、李坤先、李小虎、赵亚琳。 本文件由陕西省微生物研究所负责解释。 本文件首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西省微生物研究所 电话：029-82357089 地址：陕西省西安市西影路76号 邮编：710043 DB61/T1517-2021 1灵芝固体菌种生产技术规范 1范围 本文件规定了灵芝固体菌种生产的术语和定义、生产条件、生产工艺、菌种生产档案的要求。 本文件适用于灵芝（Ganodermalucidum）固体菌种的生产。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T12728食用菌术语 NY/T528食用菌菌种生产技术规程 NY/T1742食用菌菌种通用技术要求 3术语和定义 GB/T12728界定的术语和定义适用于本文件。 3.1 母种stockculture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。 [来源：GB/T12728——2006，2.5.7] 3.2 原种pre-culturespawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。 [来源：GB/T12728—2006，2.5.8] 3.3 栽培种spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也 称三级种。 [来源：GB/T12728—2006，2.5.9] 3.4 固体菌种solidspawn 生长在固体培养料上的菌种。 DB61/T1517-2021 2[来源：GB/T12728—2006，2.5.31] 4生产条件 4.1技术人员 应按照《食用菌菌种管理办法》的规定配备生产技术人员和检验人员。 4.2生产环境要求 应符合NY/T528中4.2的规定。 4.3厂房设置和布局 应符合NY/T528中4.3的规定。 4.4基本设备 应配备称量用具、蒸煮设备、母种培养基分装设备、拌料机、装袋机、高压灭菌和常压灭菌设备、 净化工作台或接种箱、接种工具、恒温培养箱或培养室、培养架、烘箱、除湿设备、备用电源（发电机）、 冰箱或冷库、显微镜等。高压灭菌设备等压力容器应符合《特种设备使用管理规则》和《固定式压力容 器安全技术监察规程》的规定。 4.5种源 应符合NY/T528中4.5的规定。 5生产工艺 5.1菌种分类 固体菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）。 5.2母种生产 5.2.1容器 应符合NY/T528中4.7.1.2的规定。 5.2.2备料 见附录A。 5.2.3培养基配料、分装 选无青皮、未发芽的新鲜马铃薯洗净、去皮，称取200g切成薄片或小块。加水1200mL煮沸20min～ 30min，煮至熟而不烂，用先预湿的4层纱布过滤。滤液中加入20g葡萄糖搅拌溶化，再加入20g琼脂， 边煮边搅拌至琼脂全部溶化。加水定容至1000mL。分装量为试管长度的1/5～1/4，管口保持干净，最 后塞上试管塞。将分装好的试管直立放入内锅，用牛皮纸或报纸包住试管塞。 5.2.4高压灭菌 DB61/T1517-2021 3121℃灭菌30min。 5.2.5冷却 灭菌结束，自然降压至零。 5.2.6斜面培养基制备 降温至50℃～60℃，将试管的一端斜放在1cm高的木条上摆出斜面，斜面顶端距试管口不少于5 cm。斜面摆放完毕应迅速覆盖棉布。 5.2.7灭菌效果检查 随机抽取母种培养基总数的3%～5%，置于28℃～35℃恒温条件培养48h，无微生物长出，即为灭 菌合格。 5.2.8接种 5.2.8.1接种场地和工具的消毒 按照NY/T528中4.7.7.2和4.7.7.3的规定对接种场地和工具严格消毒。 5.2.8.2接种操作 应符合NY/T528中4.7.7的规定。 5.2.9培养 温度控制在23℃～26℃，通风避光培养。 5.2.10检验 应符合NY/T1742中5.2.1的规定。 5.3原种、栽培种生产 5.3.1容器 应符合NY/T528中4.7.1.3和4.7.1.4的规定。 5.3.2培养基的配制 培养基配制见附录B。所用原材料应符合NY/T528中4.7.2的规定。 5.3.3消毒 应符合NY/T528中4.7.7.2和4.7.7.3的规定。 5.3.4接种 应符合NY/T528中4.7.7的规定。 5.3.5培养 培养温度22℃～25℃，空气相对湿度60%～70%，通风避光培养。 DB61/T1517-2021 45.3.6检查 第4d～5d、第7d～9d、第11d～12d逐袋（瓶）检查，并及时剔除未萌发、已污染、生长不良等 菌袋（瓶）。 5.4留样 应符合NY/T528中4.7.13的规定。 6菌种生产档案 应按照《食用菌菌种管理办法》的规定，建立和保存菌种生产档案。 DB61/T1517-2021 5AA 附录A （规范性） 常用培养基及其配方 A.1PDA培养基（马铃薯葡萄