书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ７３０２ — ２０１８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ７３０２ — ２００８ 饲料添加剂 　 叶酸 犉犲犲犱犪犱犱犻狋犻狏犲 — 犉狅犾犻犮犪犮犻犱 ２０１８  １２  ２８ 发布 ２０２０  ０１  ０１ 实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的第 １ 章 、 第 ４ 章和第 ６ 章为强制性的 ， 其余为推荐性的 。 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则编写 。 本标准代替 ＧＢ ／ Ｔ７３０２ — ２００８ 《 饲料添加剂 　 叶酸 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ７３０２ — ２００８ 相比主要技术差异是 ： ——— 外观和性状增加了微小颗粒 （ 见 ４．１ ）； ——— 将干燥失重改为水分 ， 测定方法采用卡尔费休测定法 （ 见 ４．２ ）； ——— 增加了重金属 （ 以 Ｐｂ 计 ） 不大于 １０．０ｍｇ ／ ｋｇ 的要求 （ 见 ４．２ ）； ——— 增加了总砷不大于 ２．０ｍｇ ／ ｋｇ 的要求 （ 见 ４．２ ）。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出并归口 。 本标准起草单位 ： 国家饲料质量监督检验中心 （ 武汉 ）、 帝斯曼维生素 （ 上海 ） 有限公司 。 本标准主要起草人 ： 刘小敏 、 张进 、 高利红 、 肖平 、 王峻 、 王思思 、 高俊峰 、 黄婷 。 ＧＢ ／ Ｔ７３０２ — ２００８ 的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ７３０２ — １９８７ 。 Ⅰ 犌犅 ７３０２ — ２０１８ 饲料添加剂 　 叶酸 １ 　 范围 本标准规定了饲料添加剂叶酸的要求 、 试验方法 、 检验规则及标签 、 包装 、 运输 、 贮存等 。 本标准适用于化学合成法制得的饲料添加剂叶酸 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６０１ 　 化学试剂 　 标准滴定溶液的制备 ＧＢ ／ Ｔ６０２ 　 化学试剂 　 杂质测定用标准溶液的制备 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 　 化学试剂 　 试验方法中所用制剂及制品的制备 ＧＢ ／ Ｔ６０６ 　 化学试剂 　 水分测定通用方法 　 卡尔 · 费休法 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ１０６４８ 　 饲料标签 ＧＢ ／ Ｔ１３０７９ 　 饲料中总砷的测定 ＧＢ ／ Ｔ１４６９９．１ 　 饲料 　 采样 　 ３ 　 化学名称 、 分子式 、 相对分子质量和结构式 化学名称 ： 犖  ｛ ４ ［（ ２ 氨基 ４ 氧代 １ ， ４ 二氢 ６ 蝶啶 ） 甲氨基 ］ 苯甲酰基 ｝  犔  谷氨酸分子式 ： Ｃ １９ Ｈ １９ Ｎ ７ Ｏ ６ 相对分子质量 ： ４４１．４０ （ 以 Ｃ １９ Ｈ １９ Ｎ ７ Ｏ ６ 计 ， 按 ２０１６ 年国际相对原子质量表计算 ） 结构式 ： ４ 　 要求 ４ ． １ 　 外观和性状 本品为黄色或橙黄色结晶性粉末或微小颗粒 ， 无臭 、 无味 。 在水 、 乙醇 、 丙酮 、 三氯甲烷或乙醚中不溶 ， 在氢氧化碱或碳酸钠的稀溶液中溶解 。 １ 犌犅 ７３０２ — ２０１８ ４ ． ２ 　 技术指标 饲料添加剂叶酸的技术指标应符合表 １ 要求 。 表 １ 　 技术指标 项目 指标 叶酸 （ 以 Ｃ １９ Ｈ １９ Ｎ ７ Ｏ ６ 干基计 ）／ ％ ９５．０ ～ １０２．０ 水分 ／ ％ ≤ ８．５ 炽灼残渣 ／ ％ ≤ ０．５ 重金属 （ 以 Ｐｂ 计 ）／（ ｍｇ ／ ｋｇ ） ≤ １０．０ 总砷 ／（ ｍｇ ／ ｋｇ ） ≤ ２．０ ５ 　 试验方法 除特殊说明外 ， 所有使用的试剂均为分析纯 ， 色谱和光谱所用水应符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中一级水规定 ， 其他实验用水应符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中二级水规定 ， 试剂和溶液的制备应符合 ＧＢ ／ Ｔ６０１ 、 ＧＢ ／ Ｔ６０２ 和 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 的规定 。 ５ ． １ 　 外观和性状检查 取适量的样品置于清洁 、 干燥的白瓷盘中 ， 在自然光线下观察其色泽和形态 ， 并嗅其气味 。 ５ ． ２ 　 鉴别试验 ５ ． ２ ． １ 　 试剂和材料 ５ ． ２ ． １ ． １ 　 氢氧化钠溶液 ： 犮 （ ＮａＯＨ ） ＝０．１ｍｏＬ ／ Ｌ 。 ５ ． ２ ． １ ． ２ 　 高锰酸钾溶液 ： 犮 （ ＫＭｎＯ ４ ） ＝０．１ｍｏＬ ／ Ｌ 。 ５ ． ２ ． ２ 　 仪器设备 ５ ． ２ ． ２ ． １ 　 分光光度计 。 ５ ． ２ ． ２ ． ２ 　 分析天平 ： 感量为 ０．０００１ｇ 。 ５ ． ２ ． ３ 　 鉴别方法 ５ ． ２ ． ３ ． １ 　 称取适量试样 （ 约 ２ｍｇ ）， 加氢氧化钠溶液 １０ｍＬ ， 振摇使溶解 ， 加高锰酸钾溶液 １ 滴 ， 振摇混匀后 ， 溶液显蓝绿色 ， 在紫外光灯下 ， 显蓝绿色荧光 。 ５ ． ２ ． ３ ． ２ 　 取样后 ， 加氢氧化钠溶液制成每 １ｍＬ 中含 １０ μ ｇ 样品的溶液 ， 用分光光度计测定 ， 在 ２５６ｎｍ±１ｎｍ 、 ２８３ｎｍ±２ｎｍ 及 ３６５ｎｍ±４ｎｍ 的波长处有最大吸收 。 吸收度 ２５６ｎｍ 与吸收度 ３６５ｎｍ 的比值应为 ２．８ ～ ３．０ 。 ５ ． ３ 　 叶酸含量测定 ５ ． ３ ． １ 　 内标法 （ 仲裁法 ） ５ ． ３ ． １ ． １ 　 试剂和材料 ５ ． ３ ． １ ． １ ． １ 　 磷酸二氢钾 ： 优级纯 。 ２ 犌犅 ７３０２ — ２０１８ ５ ． ３ ． １ ． １ ． ２ 　 氢氧化钾溶液 ： 犮 （ ＫＯＨ ） ＝０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 。 ５ ． ３ ． １ ． １ ． ３ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ５ ． ３ ． １ ． １ ． ４ 　 氨水溶液 ：（ ５＋９５ ）。 ５ ． ３ ． １ ． １ ． ５ 　 烟酰胺内标液 ： 取烟酰胺适量 ， 加水溶解并稀释制成 １．０ｍｇ ／ ｍＬ 的溶液 。 ５ ． ３ ． １ ． １ ． ６ 　 流动相 ： 称取 ６．８ｇ 磷酸二氢钾 ， 加入 ７０ｍＬ 氢氧化钾溶液 （ ５．３．１．１．２ ）， 用水稀释成约 ８５０ｍＬ 并调节 ｐＨ 至 ６．３±０．１ ， 加入甲醇 ８０ｍＬ ， 用水稀释至 １０００ｍＬ 。 ５ ． ３ ． １ ． １ ． ７ 　 标准溶液 ： 准确称取叶酸对照品 （ 叶酸纯度 ≥ ９１．４％ ， 以 Ｃ １９ Ｈ １９ Ｎ ７ Ｏ ６ 计 ） ２１．９ｍｇ ， 精确到 ０．０００１ｇ 。 置于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 加入 ０．５％ 氨溶液约 ６０ｍＬ 溶解 ， 准确加入烟酰胺内标液 （ ５．３．１．１．５ ） ２０ｍＬ ， 用 ０．５％ 氨溶液稀释至刻度 ， 摇匀 。 此标准溶液每 １ｍＬ 含叶酸 ２００ μ ｇ ， 现配现用 。 ５ ． ３ ． １ ． ２ 　 仪器设备 ５ ． ３ ． １ ． ２ ． １ 　 分析天平 ： 感量为 ０．０００１ｇ 和 ０．００００１ｇ 。 ５ ． ３ ． １ ． ２ ． ２ 　 超声波清洗器 。 ５ ． ３ ． １ ． ２ ． ３ 　 酸度计 。 ５ ． ３ ． １ ． ２ ． ４ 　 液相色谱仪 ， 配紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ５ ． ３ ． １ ． ３ 　 试验步骤 ５ ． ３ ． １ ． ３ ． １ 　 试样溶液制备 称取试样适量 （ 约相当于叶酸 ０．２ｇ ， 精确到 ０．０００２ｇ ）， 置于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 加入氨水溶液 （ ５．３．１．１．４ ） 置于超声波清洗器超声 ， 溶解 ， 定容 ； 精确移取 １０．０ｍＬ 溶液 ， 加入烟酰胺内标液 （ ５．３．１．１．５ ） ２０．０ｍＬ ， 用氨水溶液 （ ５．３．１．１．４ ） 稀释至刻度 ， 摇匀 。 ５ ． ３ ． １ ． ３ ． ２ 　 试验 ５ ． ３ ． １ ． ３ ． ２ ． １ 　 参考色谱条件 参考色谱条件如下 ： ——— 色谱柱 ： Ｃ １８ 色谱柱 ， 粒度 ５ μ ｍ ， 柱长 ２５０ｍｍ ， 内径 ４ｍｍ 不锈钢柱或性能相当者 ； ——— 流动相 ： ４．３．１．１．６ ； ——— 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ——— 柱温 ： 室温 ； ——— 进样量 ： １０ μ Ｌ ～ ２０ μ Ｌ ； ——— 检测波长 ： ２５４ｎｍ 。 ５ ． ３ ． １ ． ３ ． ２ ． ２ 　 预试验 ５ ． ３ ． １ ． ３ ． ２ ． ２ ． １ 　 叶酸与内标物质峰的分离度应大于 １．５ 。 ５ ． ３ ． １ ． ３ ． ２ ． ２ ． ２ 　 取叶酸标准溶液 ， 连续进样 ５ 次 ， 其峰面积测量值的相对偏差应不大于 ２．０％ 。 ５ ． ３ ． １ ． ３ ． ２ ． ３ 　 定量试验 取标准溶液 （ ５．３．１．１．７ ） 及试样溶液 （ ５．３．１．３．１ ）， 分别连续进样 ３ 次 ～ ５ 次按峰面积计算校正因子 ， 并用其平均值计算试样中叶酸含量 。 ５ ． ３ ． １ ． ４ 　 试验数据处理 叶酸含量 （ 以 Ｃ １９ Ｈ １９ Ｎ ７ Ｏ ６ 干基计 ） 狑 １ 以质量分数表示 ， 数值以百分数 （ ％ ） 计 ， 按式 （ １ ）、 式 （ ２ ） 计算 ： ３ 犌犅 ７３０２ — ２０１８