ICS71.100.70 CCSY42 团 体 标 准 T/ZHCA030—2024 化妆品舒缓功效测试 重建表皮模型白介素-8生成抑制法 Testofsoothingefficacyforcosmetics— Methodforinhibitinginterleukin-8productionofreconstructedepidermalmodel 2024-01-15发布 2024-04-15实施 浙江省健康产品化妆品行业协会发布 中国标准出版社出版 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由浙江省食品药品检验研究院提出。 本文件由浙江省健康产品化妆品行业协会(ZHCA)归口。 本文件起草单位:浙江省食品药品检验研究院、广东博溪生物科技有限公司、珀莱雅化妆品股份有 限公司、杭州优玛达生物科技有限公司、杭州捷诺飞生物科技股份有限公司、高浪控股股份有限公司。 本文件主要起草人:桑晶、谢珍、李潇、杨鑫、颜贵卉、欧阳杨、徐行行。 ⅠT/ZHCA030—2024 中国标准出版社 全国团体标准信息平台 化妆品舒缓功效测试 重建表皮模型白介素-8生成抑制法 1 范围 本文件描述了化妆品舒缓功效的一种体外测试方法。 本文件适用于护肤类化妆品及原料舒缓功效的测试。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 重建表皮模型 reconstructedepidermalmodel 分离人组织表皮细胞作为种子细胞,经过体外培养,制备成与人表皮组织具有相似结构及功能的三 维组织模型。 3.2 白介素-8 interleukin-8;IL-8 巨噬细胞和上皮细胞等分泌的细胞因子。 注1:白介素是白细胞及其他特殊细胞产生并在这些细胞间发挥调节作用的细胞因子。 注2:白介素-8是白介素的一种亚型。 3.3 舒缓 soothing 有助于改善皮肤刺激等状态的功效。 4 试验原理 重建表皮模型白介素-8生成抑制法(以下简称“本方法”)利用微生物引起表皮组织发生刺激反应 的原理,即通过脂多糖诱导表皮细胞表面TLR跨膜受体,激活NF-κB炎症信号传导通路,从而下游释 放系列炎症因子,如IL-8等,引发皮肤出现红斑、瘙痒等症状的过程。通过计算受试物抑制IL-8释放 的水平来反应受试物的舒缓功效。 1T/ZHCA030—2024 中国标准出版社 全国团体标准信息平台 5 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。 5.1 重建表皮模型试剂盒:EpiKutis重建表皮模型及其培养液或其他经验证的等效模型及其培养液。 5.2 磷酸盐缓冲液(DPBS):pH7.0~7.3,不含钙、镁离子。 5.3 二甲基亚砜(DMSO)。 5.4 聚肌胞苷酸(Polyriboinosinicpolyribocytidylicacid,PolyI:C),纯度≥90%,水配成10mg/mL储 备液,终浓度为100μg/mL的溶液。 5.5 脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),纯度≥99%,水配成25mg/mL储备液,使用时终浓度为 60μg/mL的溶液。 5.6 阳性对照物:地塞米松,纯度≥98%,用DMSO配成100mg/mL储备液,使用时再用培养基稀释 到终浓度为100μg/mL的溶液。 5.7 人IL-8ELISA检测试剂盒(采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法)或其他IL-8检测试剂。 6 仪器 6.1 天平:分度值为0.0001g。 6.2 二氧化碳培养箱:37℃±1℃,CO2体积分数范围为(5±1)%,相对湿度≥95%。 6.3 可调节移液器:最大量程为1000μL、200μL、20μL。 6.4 超净工作台。 6.5 水平低速离心机:转速大于或等于1000r/min。 6.6 -80℃超低温冰箱。 6.7 细胞培养板振荡器。 6.8 酶标仪。 7 试验步骤 7.1 试验分组 试验需设置空白对照组、阴性对照组、阳性对照组和受试物组,每组至少3个表皮模型。每组具体 操作如下。 a) 阴性对照组:分别加入聚肌胞苷酸和脂多糖于培养基中,聚肌胞苷酸的终浓度为60μg/mL,脂 多糖的终浓度为100μg/mL。 b) 阳性对照组:聚肌胞苷酸和脂多糖诱导液外,还要同步加入终浓度为100μg/mL地塞米松 溶液。 c) 受试物组:聚肌胞苷酸和脂多糖诱导液外,还要同步加入相应浓度的受试物溶液。 d) 空白对照组:加不含聚肌胞苷酸和脂多糖诱导液的培养基,其余操作与阴性对照组一致。 7.2 诱导刺激 取复苏好的表皮模型除空白对照组外,表皮模型下的培养液全部更换为PolyI:C与LPS诱导 液,换液后将所有模型转移到二氧化碳培养箱中培养24h[37℃±1℃,CO2体积分数范围为(5± 2T/ZHCA030—2024 中国标准出版社 全国团体标准信息平台