湖南省植物保护学会团体标准 T/SPPHN003-2025 远缘杂交和基因组重排技术改良生防微 生物技术规程 Codeforevaluationofdistanthybridizationandgenomeshufflingtechnology intheimprovementofbiocontrolmicroorganismsICS01.040.65 CCSB15/19 T/SPPHN 2025-04-22发布 2025-04-22实施 湖南省植物保护学会发布全国团体标准信息平台 T/SPPHN003-2025 I前  言 本文件是根据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第一部分：标准的结构和起草规则》的要求编制 而成。 本文件由湖南省植物保护研究所提出。 本文件由湖南省植物保护学会归口。 本文件起草单位为湖南省植物保护研究所、宁波大学、南宁汉和生物科技股份有限公司、湖南新长 山农业发展股份有限公司、湖南省农业科学院、云南农业大学、全国农业技术推广服务中心、沈阳农业 大学。 本文件主要起草人：刘勇、张德咏、张松柏、张卓、梁承、史晓斌、苏品、罗香文、杜晓华、张宇、 葛体达、刘晓艳、余义发、张建华、李凡、刘慧、吴元华。 全国团体标准信息平台 T/SPPHN003-2025 1远缘杂交和基因组重排技术改良生防微生物技术规程 1范围 本文件规定了远缘杂交和基因组重排技术改良生防微生物技术规程的术语和定义、试剂与试材、仪 器与设备等技术要求。 本文件适用于通过人工方法将不同种间属间甚至亲缘关系更远的细胞，通过无性方式融合（合并） 成的杂合细胞，并通过对整个微生物基因组的重排选育具有目标性状菌株的新型生防微生物育种技术的 规范。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB1302/T523《平菇原生质体再生复壮技术规程》 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1出发生防微生物菌株 待改良的原始微生物菌株。 3.2原生质体 脱去细胞壁的植物、真菌或细菌细胞。 3.3原生质体再生菌株 经过原生质体再生获得的遗传性状稳定的菌株。 3.4原生质体融合 细胞通过介导和培养，在离体条件下用人工方法将不同的细胞通过无性方式融合（合并）成一个核 或多核的杂合细胞。 3.5融合菌株的选育 从同源融合子、异源融合子以及未发生融合的双亲原生质体中筛选出所需的异源融合子。 3.6融合菌株的鉴别 全国团体标准信息平台 T/SPPHN003-2025 2根据菌落表型、拮抗试验、核像观察、生物学手段及目标试验等筛选传代稳定的融合子。 3.7基因组重排技术 基于原生质体融合技术，将原生质体多轮递归融合以增加细胞之间基因的转移频率。 4试剂与培养基 4.11mol/LTris-HCl 10.34gTris-HCl和4.17gTris-OH溶解在50mLddH2O中（pH值7.8）。 4.2溶液A 0.10gMgCl2和11.98g蔗糖溶于25mLddH2O中，加入500μL1mol/L的Tris-HCl（pH值7.8）， 并将体积调节至50mL。 4.3溶液B 0.05gMgCl2和13.69g蔗糖溶于25mLddH2O中，加入500μL1mol/L的Tris-HCl（pH值7.8）， 并将体积调节至50mL。 4.4蔗糖溶液 将13.69g蔗糖溶解在50mLddH2O中。 4.5EDTA溶液 将0.70gEDTA-2Na溶解到15mLddH2O中，终浓度为372.20g/mol（pH值8.0）。 4.6SMM缓冲液 34.23g蔗糖、0.46gC4H4O4和0.38gMgCl2溶解在100mLddH2O中（pH值6.5）。 4.7PEG缓冲液 SMM中包含40%（V/V）PEG6000，10mmol/LCaCl2和5%（V/V）DMSO。 4.8溶菌酶 将0.015g溶菌酶溶解在3mLddH2O中，终浓度为5mg/mL。 注：4.1-4.7溶液过滤除菌，常温保存，4.8溶液过滤除菌，-20℃保存。 4.9DnaseI 市售，-20℃保存。 4.10LB液体培养基 全国团体标准信息平台