ICS67.100.10 CCSC1441 SHNX 上海奶业行业协会团体标准 T/SHNX001—2025 生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋 白的测定液相色谱-串联质谱法 Determinationoflactoferrin,α-lactalbuminandβ-lactoglobulininrawmilkby LC-MS/MS 2025-04-03发布 2025-05-03实施 上海奶业行业协会发布 全国团体标准信息平台 T/SHNX001—2025 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由上海奶业行业协会提出并归口。 本文件起草单位：上海市农产品质量安全中心、上海市动物疫病预防控制中心、光明牧业有限公司、 光明乳业股份有限公司、上海市质量监督检验技术研究院、上海奶业行业协会、上海必诺检测技术服务 有限公司、上海农林职业技术学院。 本文件主要起草人：祁兵、陈柔含、马颖清、沈秀平、邓波、周雨璊、郑小平、徐致远、朱伟、王 敏、卢洪秀、吴剑平、陈小弟、金佳伟。 全国团体标准信息平台 T/SHNX001—2025 1生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的测定液相色谱- 串联质谱法 1范围 本文件规定了生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样中的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白经酶解作用水解成特征性肽段，以液相色谱-串联质谱 法测定目标蛋白的特征性肽段，基质匹配标准曲线外标法定量，计算试样中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β- 乳球蛋白的含量。 5试剂或材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。 5.1试剂 5.1.1水：GB/T6682，一级水。 5.1.2碳酸氢铵。 5.1.3二硫苏糖醇。 5.1.4碘代乙酰胺。 5.1.5乙酸。 5.1.6胰蛋白酶：序列分析纯，活力单位≥4500U/mg，或性能相当者。 5.1.7甲酸：色谱纯。 5.1.8乙腈：色谱纯。 5.1.9鸡蛋蛋清粉：食品级。 5.2试剂配制 5.2.1碳酸氢铵溶液（100mmol/L）：称取0.79g碳酸氢铵，用水溶解后稀释至100mL。 5.2.2二硫苏糖醇溶液（500mmol/L）：称取0.771g二硫苏糖醇，用碳酸氢铵溶液（100mmol/L）溶 解后定容至10mL。 5.2.3碘代乙酰胺溶液（500mmol/L）：称取0.925g碘代乙酰胺，用碳酸氢铵溶液（100mmol/L）溶 解后定容至10mL。 5.2.4乙酸溶液（1%）：吸取0.1mL乙酸，用水稀释并定容至10mL。 全国团体标准信息平台 T/SHNX001—2025 25.2.5胰蛋白酶溶液（100μg/mL）：称取1mg胰蛋白酶，用乙酸溶液（1%）溶解后稀释至10mL， 现用现配。 5.2.6甲酸溶液（0.1%）：吸取1.0mL甲酸，用水稀释并定容至1000mL。 5.2.7甲酸乙腈溶液（0.1%）：吸取1.0mL甲酸，加入乙腈稀释并定容至1000mL。 5.2.8空白基质溶液：称取0.10g鸡蛋蛋清粉，用水定容至50mL备用。 5.3标准品 5.3.1乳铁蛋白标准品（CAS号：146897-68-9）：纯度≥95%，铁含量≤35mg/100g，或经国家认证 并授予标准物质证书的标准品。 5.3.2α-乳白蛋白标准品（CAS号：9051-29-0）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的 标准品。 5.3.3β-乳球蛋白标准品（CAS号：9045-23-2）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的 标准品。 5.4标准溶液配制 5.4.1乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准储备液（1mg/mL）：分别称取10.0mg乳铁蛋白、α- 乳白蛋白和β-乳球蛋白标准品，用水定容至10mL。混匀，0~4℃下保存，可保存3个月。 5.4.2混合标准中间液（200μg/mL）：分别准确移取2.0mL的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标 准储备液于10mL容量瓶中，用空白基质溶液稀释至10mL，现用现配。 5.4.3标准系列工作液：吸取适量的混合标准中间液，用空白基质溶液逐级稀释至1.0μg/mL、5.0μg/mL、 10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL和200.0μg/mL标准系列工作液，现用现配。 5.5材料 5.5.11.5mL离心管：聚丙烯材质。 5.5.250mL离心管：聚丙烯材质。 5.5.3水相微孔滤膜：0.22μm，聚醚砜材质。 6仪器和设备 6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。 6.2天平：感量0.01g和0.01mg。 6.3冷冻离心机：转速≥10000r/min。 6.4涡旋混合仪。 6.5超声波仪。 6.6恒温振荡箱或恒温振荡水浴锅。 7试样的制备与保存 7.1试样的制备 取适量新鲜或解冻的生牛乳试样，搅拌混匀。 7.2试样的保存 -18℃及以下保存。 8分析步骤 8.1前处理 称取2±0.02g试样于50mL离心管，用水混匀，转移至50.0mL刻度试管，定容至刻度。移取200μL 样品溶液置于1.5mL离心管中，依次加入150μL碳酸氢铵溶液、15μL二硫苏糖醇溶液，混匀，于60℃ 恒温反应1h；冷却至室温，加入30μL碘代乙酰胺溶液，暗处静置0.5h，加入50μL胰蛋白酶溶液，混匀 全国团体标准信息平台