ICS 67.100 CCS C 144 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0377—2025 牛奶和奶粉中 9种青霉素残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of nine penicillin residues in milk and milk powder by HPLC-MS/MS 2025-03- 17发布 2025-03- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0377—2025 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全））、北方民族大学、宁夏计量质量检验检测研究院、宁夏化学分析测试协会 。 本文件主要起草人：朱燕燕、马桂娟、卜春苗、姚博伟、张学玲、刘竞择、高永梅、孙少忆 、 吕毅、吴明 、张小飞。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0377—2025 1牛奶和奶粉中 9种青霉素残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了 牛奶和奶粉中 9种青霉素（阿莫西林 、氨苄西林 、哌拉西林 、青霉素 G、青霉素 V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林）的液相色谱 -串联质谱检测方法。 本文件适用于牛奶和奶粉 中9种青霉素的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样用70%的乙腈水溶液超声提取 ，经分散固相萃取法净化后 ，通过反相色谱柱分离 ，供液相 色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1乙腈：色谱纯。 5.1.2甲酸：优级纯。 5.1.3十八烷基（ C18）粉末： 粒径 50μm。 5.1.4 N-丙基乙二胺（ PSA）粉末： 粒径 50μm。 5.1.5无水硫酸镁：优级纯。 5.1.6 0.2%甲酸水溶液： 取2.0mL甲酸（ 5.1.2），用水定容到 1000mL，混匀。 5.1.7 0.2%甲酸乙腈溶液： 取2.0mL甲酸（ 5.1.2）用乙腈（ 5.1.1）定容到 1000mL，混匀。 5.1.8 70%乙腈溶液： 取700mL乙腈（ 5.1.1），用水定容到 1000mL，混匀。 5.1.9 20%乙腈溶液： 取200mL乙腈（ 5.1.1），用水定容到 1000mL，混匀。 5.2标准品 9种青霉素标准品名称、化学分子式、 CAS号和纯度 见附录表 A。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0377—2025 25.3标准溶液配制 5.3.1标准储备液（ 1.0mg/mL ）：分别准确称取 9种青霉素 10.00mg，用水溶解并定容至 10.0mL， 避光冷冻贮存， 有效期1个月。 5.3.2混合标准储备液 ：分别移取青霉素 G和萘夫西林标准储备液适量， 混合后用水逐级稀释得到 1.0μg/mL的混合标准储备液 I;将其余 7种青霉素用同样的方式进行稀释， 得到 1.0μg/mL的混合标 准储备溶液 II，避光冷冻贮存， 有效期7天。 5.3.3标准工作溶液 ：分别准确吸取不同体积混合标准储备液 I和II，用空白样品 基质定容至 1.0 mL， 配制成青霉素 G和萘夫西林的浓度分别为 0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、5.0、10.0ng/mL ，其余 7种青霉 素的浓度分别为 0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的系列标准工作溶液，临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源。 6.2天平：感量 0.01m g和0.01g。 6.3涡旋混合器。 6.4高速离心机：转速 不低于 8000r/min 。 6.5超声波清洗器。 6.6氮吹仪。 6.7有机微孔滤膜， 孔径 0.22μm，或相当者。 7分析步骤 7.1制备与保存 取适量牛奶，混合均匀， 于-18℃避光保存 。 取适量奶粉，混合均匀，常温避光保存。 7.2提取与净化 7.2.1提取 称取牛奶试样 5g或奶粉试样 1g（精确至 0.01g）于50mL离心管中，加 入70%乙腈溶液 （5.1.8）10mL，涡旋混合 1min，超声 5min，8000 r/min 离心 5 min，取上清液， 残渣加 70%乙腈 溶液（ 5.1.8）10mL重复提取一次，合并上清液， 用70%乙腈溶液（ 5.1.8）定容至25.0mL。 7.2.2 净化 吸取 10mL上清液， 置于预先装有 150 mg C18（5.1.3）、100 mg PSA（5.1.4）、500 mg 无水硫 酸镁（ 5.1.5）的净化管中， 涡旋 2min，8000 r/min离心 5 min，取5mL上清液于 45 ℃水浴中氮气 吹干，精密加入 20%乙腈溶液（ 5.1.9）1.0 mL，涡旋混匀，有机滤膜（ 6.7）过滤后，上机测定。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18，2.1mm×150mm ，粒径 3.5μm或性能相当。 b）柱温： 30℃。 c）流动相： A：0.2%的甲酸水溶液 （5.1.6），B：0.2%甲酸乙腈溶液 （5.1.7）；梯度洗脱见表 1。 全国团体标准信息平台