ICS 67.160.10 CCS C 151 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0371—2025 葡萄酒中 5种羟基苯甲酸类物质的测定 高 效液相色谱 -串联质谱法 Determination of 5 Hydroxybenzoic Acid Compounds in Wine by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry(LC-MS/MS) 2025-03- 10发布 2025-03- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0371—2025 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全））、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：汤丽华、马雪梅、岳苑、李强、朱燕燕、吕毅、王泽岚、王琛、吴明、马 桂娟、张小飞。 全国团体标准信息平台 1葡萄酒中 5种羟基苯甲酸类物质的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了 葡萄酒中 5种羟基苯甲酸类物质（没食子酸、香草酸、丁香酸、对羟基苯甲酸 、 原儿茶酸）的液相色谱质谱检测方法。 本文件适用于葡萄酒中没食子酸、香草酸、丁香酸、对羟基苯甲酸和原儿茶酸的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样加入水，超声提取后提取液经分散固相萃取法净化，供高效液相色谱 -串联质谱仪测定， 外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1 乙腈：色谱纯。 5.1.2 甲醇：色谱纯。 5.1.3 甲酸：优级纯。 5.1.4 N-丙基乙二胺（ PSA）粉末： 粒径 50μm。 5.1.5 0.1%甲酸水溶液： 量取 1mL甲酸，用水定容到 1000mL，摇匀。 5.2标准品 5种羟基苯甲酸物质中英文通用名称、 CAS号、化学分子式、 纯度见附录 A。 5.3标准溶液配制 5.3.1 标准储备液（ 1.0mg/mL ）：分别准确称取没食子酸、香草酸、丁香酸、对羟基苯甲酸、原儿 茶酸标准品 10mg（准确至 0.1mg）于10mL容量瓶中 ，分别用甲醇（5.1.2）溶解并定容至刻度 ，4℃ 保存。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0371—2025 25.3.2 混合标准中间液（ 10.0μg/mL ）：分别准确吸取没食子酸、香草酸、丁香酸、对羟基苯甲酸 、 原儿茶酸标准储备液（ 5.3.1）各0.1mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度， 4℃保存。 5.3.3 混合标准使用液：准确吸取混合标准中间液（ 5.3.2）适量，用水配制成 浓度为 10.0 ng/mL~500.0 ng/mL的混合标准工作液，临用现配。 6仪器和设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源 (ESI)。 6.2 分析天平： 感量 0.1mg。 6.3 涡旋混合器。 6.4 超声波发生器。 6.5 离心机：转速 不低于 8000r/min 。 6.6 水相微孔滤膜， 孔径 0.22μm，或性能相当者。 7分析步骤 7.1试样制备 取代表性样 品2瓶摇匀分装，冷藏保存。 7.2试样的提取 吸取 5.0mL样品，加入 15mL水，涡旋混匀 ，超声 10min，静置后取 2mL加入至盛有 100mgPSA （5.1.4）粉末的净化管中， 涡旋 5min，8000r/min 离心 3min，取上清液经 0.22μ m微孔滤膜（ 6.6） 过滤，上机待测。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18色谱柱， 2.1 mm×100 mm，粒径 1.8μm或性能相当者。 b）柱温： 40℃。 c）流动相： A：0.1%甲酸水溶液（ 5.1.5）， B：乙腈（ 5.1.1）；梯度洗脱见表 1。 d）流速： 0.30mL/min 。 e）进样量： 10μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.30 85 15 1.00 0.30 85 15 5.00 0.30 45 55 6.00 0.30 15 85 6.01 0.30 85 15 8.00 0.30 85 15 全国团体标准信息平台