IICS 67.160.10 CCS C 151 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0369—2025 葡萄酒中 4种羟基肉桂酸类物质的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 Determination of 4 Hydroxycinnamic Acid Compounds in Wine by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry(LC-MS/MS) 2025-03- 10发布 2025-03- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全））、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：汤丽华、马雪梅、岳苑、郭阳、朱燕燕、吕毅、王琛、王泽岚、吴明、马 桂娟、张小飞。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0369-2025 1葡萄酒中 4种羟基肉桂酸类物质的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了葡萄酒中绿原酸 、对香豆酸 、咖啡酸和 阿魏酸 4种羟基肉桂酸的高效液相色谱 -质 谱检测方法。 本文件适用于葡萄酒中绿原酸、对香豆酸、咖啡酸和 阿魏酸 4种羟基肉桂酸的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样经水涡旋振荡提取 ，取上清液 ，经分散固相萃取净化 ，反相色谱柱分离 ，以保留时间定性 ， 供高效液相色谱 -质谱仪测定，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1 乙腈：色谱纯。 5.1.2 甲醇：色谱纯。 5.1.3 甲酸：色谱纯。 5.1.4 0.1%甲酸水溶液：取甲酸（ 5.1.3）1.0 mL，用水定容到 1000mL，摇匀。 5.1.5 0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（ 5.1.3）1.0 mL，用乙腈（ 5.1.1）定容到 1000mL，摇匀。 5.1.6 十八烷基键合硅胶吸附剂（ C18）粉末： 粒径 50μm。 5.2标准品 标准品：咖啡酸（Caffeic acid，CAS号331-39-5，C9H8O4），纯度 ≥95%；对香豆酸 （p-Coumaric acid，CAS号501-98-4，C9H8O3），纯度 ≥95%；绿原酸（ Chlorogenic acid，CAS号327-97-9， C16H18O9），，纯度 ≥95%；阿魏酸（ Ferulic adid，CAS号1135-24-6 ，C10H10O4），纯度 ≥95%。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0369-2025 25.3标准溶液配制 5.3.1 标准储备液（ 1.0mg/mL ）：分别准确称取绿原酸、对香豆酸、 咖啡酸和阿魏酸标准品 10mg （准确至 0.1mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（ 5.1.2）溶解并定容至刻度， 4℃保存。 5.3.2 混合标准中间液（ 100μg/mL ）：分别准确吸取绿原酸、对香豆酸、咖啡酸和阿魏酸标准储备 液（ 5.3.1）各1.0mL于10mL容量瓶中，用水定容， 4℃保存。 5.3.3 混合标准使用液：分别准确吸取混合标准储备液（ 5.3.2）适量，纯水 配制成浓度为 20.0ng/mL~500. 0ng/mL的标准工作液，临用现配。 6仪器和设备 6.1 高效液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源 (ESI)。 6.2 分析天平： 感量 0.1mg。 6.3 涡旋混合器。 6.4 离心机：转速 不低于 8000r/min 。 6.5 超声波发生器。 6.6 水相微孔滤膜， 孔径 0.22μm，或性能相当者。 7分析步骤 7.1试样制备 取代表性样品 2瓶摇匀，冷藏保存。 7.2试样的提取 吸取 5.0mL试样于50mL离心管中， 加入 10.0mL水，涡旋振荡 提取 10min。取2mL提取液加 入含有 100mg C18粉末（5.1.6）的离心管中 ，涡旋 5min，8000r/min 离心 5min，取上清液经 0.22μ m 微孔滤膜（ 6.6）过滤，上机待测。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱， 2.1 mm×100 mm，粒径 1.8μm或性能相当者。 b）柱温： 30℃。 c）流动相： A：0.1%甲酸水溶液， B：0.1%甲酸乙腈溶液； 梯度洗脱见表 1。 d）流速： 0.30mL/min 。 e）进样量： 10μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.30 85 15 1.00 0.30 85 15 5.00 0.30 45 55 7.00 0.30 15 85 8.00 0.30 85 15 10.00 0.30 85 15 全国团体标准信息平台