ICS 67.160.10 CCS C 151 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0368—2025 葡萄酒中4种黄酮类物质的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 Determination of 4 Flavonoids in Wine by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry(LC-MS/MS) 2025-03- 10发布 2025-03- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全））、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人： 汤丽华、朱燕燕、岳苑、王泽岚、马雪梅、吕毅、李强、吴明、马桂娟 、 张小飞。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0368—2025 1葡萄酒中4种黄酮类物质的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了 葡萄酒中 4种黄酮类物质 （槲皮素 、烟花苷、芦丁、黄芩素）的液相色谱 -串联质 谱检测方法。 本文件适用于 葡萄酒中 4种黄酮类物质（槲皮素、烟花苷、芦丁、黄芩素）的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样经80%甲醇溶液涡旋超声提取，提取液经分散固相萃取净化，用高效液相色谱 -串联质谱 仪检测，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1 乙腈：色谱纯。 5.1.2 甲醇：色谱纯。 5.1.3 甲酸：色谱纯。 5.1.4 十八烷基硅烷键合硅胶（ C18）： 40μm~60μm 。 5.1.5 无水硫酸镁（ MgSO 4）粉末： 粒径 50μm。 5.1.6 N-丙基乙二胺（ PSA）粉末 :粒径 50μm。 5.1.7 0.1%甲酸溶液：取甲酸（ 5.1.3）1.0mL，用水定容到 1000mL，摇匀。 5.1.8 80%甲醇溶液：取甲醇（ 5.1.2）800mL，用水定容到 1000mL，摇匀。 5.2标准品 4种黄酮类物质中英文通用名称、化学分子式、 CAS号、纯度见附录 A。 5.3标准溶液配制 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0368—2025 25.3.1 标准储备液（ 1.0mg/mL ）：分别准确称取槲皮素、烟花苷、芦丁 和黄芩素 4种黄酮类 标准品 10mg（准确至 0.1mg），用甲醇（ 5.1.2）分别溶解并定容至 10.0mL，于 -18℃避光保存。 5.3.2 混合标准中间液（ 10.0μg/mL ）：分别准确吸取标准储备液（ 5.3.1）0.1mL，用甲醇（ 5.1.2） 定容至 10.0mL，于 -18℃避光保存。 5.3.3 混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液（ 5.3.2）适量， 用80%甲醇溶液 （5.1.8） 配制成浓度为 10.0 ng/mL~500.0 ng/mL的标准工作液，临用现配。 6仪器和设备 6.1 高效液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源 (ESI)。 6.2 分析天平： 感量 0.01mg和0.01g。 6.3 涡旋混合器。 6.4 离心机：转速 不低于 8000r/min 。 6.5 超声波发生器。 6.6 有机微孔滤膜， 孔径 0.22μm，或性能相当者。 7分析步骤 7.1试样制备 取代表性样品 2瓶摇匀分装，冷藏保存。 7.2测定步骤 吸取 5.0mL样品于 50mL离心管中 ，加入 10mL 80%甲醇溶液 （5.1.8），涡旋振荡后超声 5min， 8000r/min 离心 5min。移取上清液 2mL至装有 50mg C18（5.1.4）、 100mg无水硫酸镁 （5.1.5）和 30mgPSA （5.1.6）的离心管中， 涡旋混合 2min，8000 r/min离心 5 min，有机滤膜（ 6.6）过滤后， 待测定。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18色谱柱， 2.1mm×100mm，粒径 3.5μm或性能相当者。 b）柱温： 40℃。 c）流动相： A：0.1%甲酸溶液， B：乙腈； 梯度洗脱见表 1。 d）流速： 0.3mL/min 。 e）进样量： 10μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.3 95 5 1.00 0.3 95 5 5.00 0.3 50 50 7.00 0.3 5 95 9.00 0.3 5 95 全国团体标准信息平台