ICS 65.020 CCS A 017 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/ NAIA 0348-2024 黄芩中7种黄酮类物质含量的测定 高效液相色谱法 Determination of 7 flavanoids in astragalus High performance liquid chromatography 2024-12-12发布 2024-12-31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布T/NAIA 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0348-2024 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏食品检测研究院、宁夏 化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：刘霞、牛艳、杨静、 王晓菁、石欣、吴燕、苟春林、张锋锋、李彩 虹、杨春霞、王彩艳、陈翔、开建荣、张学玲、张小飞。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0348-2024 1黄芩中7种黄酮类物质含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了黄芩中黄酮类物质的液相色谱测定方法。 本文件适用于液相色谱法测定黄芩中黄芩苷 、汉黄芩苷 、黄芩素、汉黄芩素 、木犀草素 、 芹菜素、 千层质素 A的液相色谱法测定。 本文件的方法检出 限：黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素 的方法检出限均为 0.075 mg/kg，木犀草素、芹菜素 的方法检出限均为 0.15 mg/kg，千层质素 A的的方法检出 限为 0.10 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要规定的术语和定义。 4 原理 试样中的黄酮类物质 经70%甲醇超声提取，旋蒸近干，甲醇定容，微孔滤膜过滤，液 相色谱仪检测和确证，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.2 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.3 磷酸（ H3PO 4）： 分析纯。 5.4 黄芩苷（Baicalin，CAS号21967-41-9 ，纯度≥ 98%）、木犀草素（Luteolin，CAS号491-70-3， 纯度≥ 98%）、汉黄芩苷（ Wogonoside ，CAS号51059-44-0 ，纯度≥ 98%）、黄芩素 （Baicalein ，CAS号491-67-8，纯度≥ 98%）、芹菜素（Apigenin，CAS号520-36-5，纯度≥ 98%）、汉黄芩素（ Wogonin，CAS号632-85-9，纯度≥ 98%）和千层质素 A（Oroxylin A，CAS号480-11-5，纯度≥ 98%）的液相色谱法测定。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0348-2024 25.5 标准储备溶液：分别准确称取 黄芩苷、木犀草素、汉黄芩苷、黄芩素、芹菜素、汉黄 芩素和千层质素 A标准物质 10mg（精确至 0.0001g），用甲醇溶解 并定容至 10.0mL，配制 成1000 mg/L的标准储备液， 0℃~4℃贮存。 5.6 0.1%磷酸溶液（体积分数）： 量取 1mL磷酸，用水定容至 1000mL。 5.7 70%甲醇溶液（体积分数）： 量取 700mL甲醇，用水定容至 1000mL。 5.8 微孔滤膜： 0.22 μm，有机相。 5.9 离心管： 50 mL。 6 仪器与设备 6.1 液相色谱仪：配有紫外检测器。 6.2 分析天平： 感量 0.01 g和0.0001 g。 6.3 高速万能粉碎机： 10000 r/min。 6.4 超声波清洗机 。 6.5 离心机： 4000 r/min。 6.6 涡旋混合器。 6.7 旋转蒸发仪。 7 分析步骤 7.1 试样的制备 将试样去除杂质， 60℃烘箱中烘干 48h，用高速万能粉碎机粉碎，四分法分取， 过40 目筛，置于密封袋中备用。 7.2 试样的提取 平行做两份试样 。称取试样 0.2 g（精确至 0.0001 g）于50 mL离心管，加入 40 mL70% 甲醇溶液（ 5.7），充分振摇混匀， 超声提取 30 min，放入离心机， 4000 r/min离心 3 min， 过滤，再取残渣加入 40 mL70%甲醇溶液（5.7），重复提取一次 ，合并 2次滤液，旋蒸后用 甲醇（ 5.2）定容于 50mL容量瓶中， 经0.22μ m滤膜过滤，待测定。同试样进行空白试验 ， 除不称取样品外，均按试样步骤进行。 7.3 液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18柱， 250 mm×4.6 mm（i.d）， 5 μm，或性能相当者； b）柱温： 40 ℃； c）流速： 0.8 mL/min； d）流动相： A相为 0.1%磷酸溶液（ 5.6）， B相为乙腈， 梯度洗脱条件见表 1； e）进样量： 10.0 μL。 f）检测波长： 280 nm。 全国团体标准信息平台