ICS 67.160.10 CCS C 151 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0339—2024 葡萄酒中 5-羟甲基糠醛的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 Determination of 5-Hydroxymethylfurfural in Wine by HPLC-MS/MS 2024-11-25发布 2024-12-01实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0339—2024 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（ 国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全） ）、吐鲁番市质量与计量检测所、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：朱燕燕、马桂娟、汤丽华、李强、张学玲、马利伟、宋钰、刘继辉、刘竞 择、王鹏、高永梅、姚晓瑜、吕毅、吴明、张小飞。 全国团体标准信息平台 1葡萄酒中 5-羟甲基糠醛的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了 葡萄酒中 5-羟甲基糠醛的高效液相色谱 -串联质谱检测方法。 本文件适用 于葡萄酒中 5-羟甲基糠醛的测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样经甲醇 -水溶液（10+90，体积比）超声提取 ，经十八烷基硅烷键合硅胶分散固相萃取净化 ， 液相色谱 -串联质谱仪检测，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂和材料 5.1.1甲醇：色谱纯。 5.1.2甲酸：色谱纯。 5.1.3甲醇 -水溶液（10+90，体积比） ：量取 100mL甲醇加入 900 mL水中，混匀。 5.1.4 0.1%甲酸溶液：取 甲酸 1 mL，用水溶解并稀释至 1000mL。 5.1.5 0.1%甲酸甲醇溶液： 取甲酸 1 mL，用甲醇定容到 1000mL。 5.1.6十八烷基硅烷键合硅胶（ C18）：粒径 40μm～60μm。 5.1.7微孔滤膜（水相）： 13 mm×0.22 μm，或相当者。 5.2标准品 5-羟甲基糠醛（纯度： ≥99.0%，CAS：67-47-0）。 5.3标准溶液配制 5.3.1标准储备液： 准确称取 5-羟甲基糠醛标准品适量，用甲醇 -水溶液（ 5.1.3）溶解并定容至 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0339—2024 210.0mL，配制成浓度为 1.0mg/mL标准储备溶液， 4℃以下避光保存， 有效期 3个月。 5.3.2基质匹配标准溶液： 分别准确量取 1.0μg/mL的标准储备液适量， 用阴性葡萄酒基质定容至 1.0mL，配制成 5-羟甲基糠醛的浓度分别为 10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、400.0、500.0ng/mL ， 临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源。 6.2天平：感量 0.1mg和0.01g。 6.3涡旋混合器。 6.4超声波发生器。 6.5离心机： 转速不低于 8000r/min 。 6.6色谱柱： C18，2.1mm×100mm ，粒径 1.8μm或性能相当。 7分析步骤 7.1样品前处理 称取 10g（精确至 0.01g）葡萄酒样品于 50mL具塞离心管中 ,加入 15mL甲醇 -水溶液（ 5.1.3）， 涡旋 1min，超声 20min，用甲醇 -水溶液（5.1.3）定容至刻度 ，涡旋混匀 ，备用。移取 5mL备用液， 加入至装有 100mg C18粉末（ 5.1.6）离心管中， 涡旋 2min，以6000r/min 离心 5min，吸取上清液 过微孔滤膜（ 5.1.7），待测定。 7.2仪器参考条件 7.2.1液相色谱参考条件 a）柱温： 25℃。 b）流动相： A：0.1%甲酸溶液（ 5.1.4）， B：0.1%甲酸甲醇溶液（ 5.1.5）；梯度洗脱见表 1。 c）流速： 0.3mL/min 。 d）进样量： 5μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.3 95 5 1.50 0.3 95 5 3.00 0.3 65 35 5.00 0.3 5 95 7.00 0.3 5 95 9.00 0.3 95 5 10.00 0.3 95 5 7.2.2 质谱参考条件 a）离子源：电喷雾离子源（ ESI）。 b）扫描方式：正离子扫描。 全国团体标准信息平台