CS T / NAIA 团 体 标 准 T/NAIA 0317-2024 枸杞中18种游离氨基酸和核苷的测定 液相色谱 -质谱联用法 Determination of 18 free amino acids and nucleosides in Lycium barbarum Liquid chromatography-mass spectrometry 2024-10-02发布 2024-10- 20实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 ICS 65.020.01 CCS A 017 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0317-2024 I前 言 本文件按照 GB/T1.1-2020 《标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。 本文件由宁夏回族自治区药品检验研究院提出。 本文件由宁夏化学分析测试协会归口。 本文件起草单位：宁夏回族自治区药品检验研究院（国家枸杞产品质量检验检测中心 （宁夏））、中国科学院兰州化学物理研究所 、宁夏回族自治区食品检测研究院 、宁夏卫生健 康职业技术学院、宁夏回族自治区药品质量控制与评价重点实验室。 本文件主要起草人 ：孙莹、马玲、贺凯、撖志明、姜文霞、陈欢、黄钰馨、朱捷、王宁、 高萌、尚博杨、臧娅妮、王曼泽、王宁丽、吕毅、马宗卫。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0317-2024 1枸杞中18种游离氨基酸和核苷的测定 液相色谱 -质谱联用法 1 范围 本文件规定了枸杞干果 、鲜果及原浆中 18种游离氨基酸和核苷的液相色谱 -质谱联用法 。 本文件适用于枸杞干果、鲜果及原浆 中18种游离氨基酸和核苷：天冬氨酸、苏氨酸、 丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸 、异亮氨酸 、亮氨酸、苯丙氨酸 、组 氨酸、赖氨酸、精氨酸、腺嘌呤、尿嘧啶、肌苷、鸟苷的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件不可少的条款 。其中，注日期的 引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有 的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中 18种游离氨基酸和核苷经水超声提取 ，通过液相色谱 -质谱联用仪检测 ，以保留 时间定性，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.2甲酸（ CH 2O2）：色谱纯。 5.3 0.2%甲酸溶液（体积分数 ）。 5.4 0.2%甲酸 -乙腈溶液（体积分数 ）。 5.5 0.22 μm滤膜，水相。 5.6标准品：L-天冬氨酸（ CAS号：56-84-8，）、苏氨酸（ CAS号：72-19-5）、丝氨酸（ CAS 号： 56-45-1）、谷氨酸（ CAS号： 56-86-0、甘氨酸（ CAS号： 56-40-6）、丙氨酸（ CAS号： 56-41-7）、缬氨酸（ CAS号： 72-18-4）、甲硫氨酸（ CAS号： 63-68-3）、L-异亮氨酸（ CAS 号： 73-32-5）、亮氨酸（ CAS号： 61-90-5）、苯丙氨酸（ CAS号： 63-91-2）、组氨酸（ CAS 号： 71-00-1）、L-赖氨酸（ CAS号： 56-87-1）、精氨酸（ CAS号： 74-79-3）、肌苷（ CAS号： 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0317-2024 258-63-9）、尿嘧啶（ CAS号：66-22-8）、腺嘌呤（ CAS号：73-24-5）、鸟苷（ CAS号：118-00- 3）。纯度均大于 90%的标准物质。 5.7 标准溶液配制 5.7.1标准储备液 准确称取适量的氨基酸、核苷对照品， 用水溶解并分别配置成 2 mg/mL的标准储备液， 2-8 ℃下保存。 5.7.2混合标准中间液 分别准确量取天冬氨酸 、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨 酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、肌苷、鸟苷标准储备液 （5.7.1）各1 mL，腺嘌呤、尿嘧啶标准储备液（ 5.7.1）各0.5 mL，用水溶解并稀释制成含 天冬氨酸 、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸 、异亮氨酸 、亮 氨酸、苯丙氨酸 、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、肌苷、鸟苷 20 μg/mL，含腺嘌呤 、尿嘧啶 10 μg/mL 的溶液，作为混合标准中间液， 2-8 ℃下保存。 5.7.3标准使用液 根据需要 ，将混合标准 中间液（5.7.2）用水稀释配置成适当浓度的标准使用液 ，临用新 制。 6 仪器与设备 6.1高效液相色谱 -质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2分析天平：感量（ 0.1 mg、0.01 mg）。 6.3超声波清洗器（功率： 230 W，频率 40 kHz）。 6.4高速粉碎机。 6.5组织捣碎机。 6.6冷冻高速离心机： 10000 rpm/min。 6.7涡旋振荡器。 7 分析步骤 7.1试样的制备 取-18 ℃冷冻的枸杞干果 ，用高速粉碎机 （可加少量的液氮 ）粉碎（30 g样品粉碎时间 为30 s），混匀后分别置于样品瓶中， -18 ℃冷冻备用。 取枸杞鲜果适量，去除果蒂、叶子等杂质，用组织捣碎机打浆， 2~10 ℃冷藏备用，用 前摇匀。 7.2试样的提取 取枸杞干果试样 0.5 g（枸杞鲜果浆 （原浆）2.5 g）（精确至 0.1mg），置50 mL离心管 中，准确加入水 40 mL，称定重量 ，涡旋混合 1 min，超声提取 30 min，用水补足减失的重量 ， 摇匀， 10000 rpm/min离心 10 min，上清液用 0.22 µm滤膜过滤，取续滤液待上机测定。 7.3液相色谱参考条件 全国团体标准信息平台