T / NAIA 团 体 标 准 T/NAIA 0315-2024 枸杞中生物碱 N-反式阿魏酸酪酰胺及 N-反式阿魏酰真蛸胺的含量测定 高效液相色谱法 Determination of N-trans-Feruloyltyramine and N-trans-Feruloyloctopamine in Lycium barbarum —High performance liquid chromatography 2024-10-02发布 2024-10-20实施 宁夏化学分析测试协会 发 布ICS 65.020.01 CCS A 017 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0315-2024 2前言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏回族自治区药品检验研究院提出。 本文件由宁夏化学分析测试协会归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区药品检验研究院（国家枸杞产品质量检验检测中心（ 宁夏））、中国科学院兰州化学物理研究所 、宁夏卫生健康职业技术学院 、宁夏回族自治区 药品质量控制与评价重点实验室 、宁夏农林科学院农业生物技术研究中心 、宁夏润德生物科 技有限责任公司。 本文件主要起草人：黄钰馨、马玲、尚博杨、撖志明、陈欢、臧娅妮、孙莹、王宁丽、 姜文霞、王曼泽、武亦融、郑国保、李苗、沈垚垚、马宗卫。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0315-2024 3枸杞中生物碱 N-反式阿魏酸酪酰胺及 N-反式阿魏酰真蛸 胺的含量测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了 枸杞中生物碱 N-反式阿魏酸酪酰胺和 N-反式阿魏酰真蛸胺的高效液相色 谱测定方法。 本文件适用于枸杞中生物碱 N-反式阿魏酸酪酰胺和 N-反式阿魏酰真蛸胺的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要规定的术语和定义。 4 原理 试样中的生物碱类物质 用70%甲醇溶液超声提取 ，通过碱性氧化铝固相萃取柱净化 ，高 效液相色谱仪测定，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.2 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.3 磷酸（ H3PO 4）：色谱纯。 5.4 N-反式阿魏酸酪酰胺（ N-trans-Feruloyltyramine ，CAS号66648-43-9 ）、 N-反式阿魏酰 真蛸胺（ N-trans-Feruloyloctopamine ，CAS号66648-44-0 ）。 5.5 碱性氧化铝固相萃取柱 (pH=7~9，3 mL/200 mg) 5.6 标准溶液配制 5.6.1标准储备溶液： 分别准确称取适量的 N-反式阿魏酸酪酰胺、 N-反式阿魏酰真蛸胺标准 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0315-2024 4品（精确至 0.01 mg），用甲醇溶解， 分别配制成 1 mg/mL的标准储备溶液， -4 ℃下保 存。 5.6.2混合标准中间溶液 ：分别取 N-反式阿魏酸酪酰胺和 N-反式阿魏酰真蛸胺的标准储备溶 液适量，用甲醇 稀释成 0.01 mg/mL的混合标准中间溶液， -4 ℃下保存。 5.6.3标准使用溶液：根据需要，将混合标准中间液（ 5.6.2）用甲醇稀释配制成适当浓度的 标准使用溶液，临用现配。 5.7 70%甲醇溶液（体积分数）： 量取 70 mL甲醇，用水定容至 100 mL。 5.8 0.03%磷酸溶液（体积分数）： 量取 0.3 mL磷酸，用水定容至 1000 mL。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 6.2 分析天平： 感量 0.0001 g和0.00001 g 6.3 高速万能粉碎机： 15000 r/min。 6.4 超声波清洗机 。 6.5 涡旋混合器。 7 分析步骤 7.1 试样的制备 枸杞样品于 -18 ℃冰箱中保存。试验时将样品取出，用高速万能粉碎机（可加少量的液 氮）粉碎（ 30 g样品粉碎时间为 30 s），分别置于样品瓶中， -18 ℃冷冻备用。 7.2 试样的提取 准确称取 试样 1 g（精确至 0.1mg），具塞锥形瓶中， 精密加入 70%甲醇溶液（ 5.7）10 mL ，密塞，称定重量，充分振摇混匀， 超声提取 30分钟，放冷， 用70%的甲醇补足减失 的重量，摇匀，待用。固相萃取柱经 5 mL甲醇预处理 ，精密量取样品 2 mL上样，净化，滤 液置 2 mL量瓶中， 用70%甲醇洗脱至刻度，摇匀，待测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18色谱柱， 填料粒径为 5μm，250mm×4.60mm，或性能相当者； b）柱温： 30 ℃； 全国团体标准信息平台