ICS 67. 050 CCS X 16 团 体 标 准 T/CIQA 114 - 2025 虾肝肠胞虫病原体快速鉴别 CRISPR法 Rapid diagnosis of Enterocytozoon hepatopenaei infection based on CRISPR method 2025 -04-25 发布 2025 -04-25实施 中国出入境检验检疫协会 发布 全国团体标准信息平台 目 次 前言……………………………………………………………………………… ……………………… I 1范围…………………………………………………………………………………………………… 1 2规范性引用文件……………………………………………………………………………………… 1 3 缩略语…………………………………………………………………………………………… 1 4原理…………………………… ……………………………………………………………………… 1 5试剂和材料…………………………………………………………………………………………… 2 6 仪器和设备 …………………………………………………………………………………………… 2 7 临床症状 …………………………………………………………………………………………… 3 8 采样…………………………………………………………………………………………… 3 9 试验步骤 …………………………………………………………………………………………… 3 10 结果计算 …………………………………………………………………………………………… 3 11 质量控制 …………………………………………………………………………………………… 4 12 结果判定 …………………………………………………………………………………………… 4 13 检测过程中防止交叉污染的措施 ………………………………………………………………… 4 全国团体标准信息平台 T/CIQA 114-2025 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会（ CIQA/TC10 ）提出并归口。 本文件起草单位： 南京师范大学、盐城 师范学院 、杭州努咖智能科技有限公司 、努咖智能科技 (扬 州)有限公司 、上海市生物医药研究院 。 本文件主要起草人： 吴丽娜、 王佩、唐进、李亚楠、徐晴、孟伶通、徐诗琦、 周建奎、梁启、张玉、 乔璐、马红茹。 本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目的， 印制、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字。 全国团体标准信息平台 T/CIQA 114-2025 1 虾肝肠胞虫 病病原体快速 检测 CRISPR法 1 范围 本文件给出了虾肝肠 胞虫病（ Enterocytozoon hepatopenaei disease）采样和重组酶 介导扩增 （recombinase -aid amplification ，RAA）结合 CRISPR的方法以及结果判定。 本文件适用于虾肝肠胞虫 病病原体的快速检测 。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件 。 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 crRNA：规律间隔成簇短回文重复序列核糖核苷酸（ CRISPR RNA ） CRISPR：规律间隔成簇短回文重复序列 （Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats ） EHP：虾肝肠胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei ） RAA：重组酶介导扩增 （Recombinase -aid amplification ） RNA：核糖核酸（ Ribonucleic acid ） RPA：重组酶聚合酶扩增 （Recombinase polymerase amplification ） SWP：胞子壁蛋白 （Spore wall protein ） 4 原理 采用合适的基因组 DNA提取技术对样本（虾组织）中的 EHP DNA 进行提取，然后采用 RAA对目 的序列进行特异性扩增，随后使用 Cas12a技术对 RAA扩增产物进行特异性识别及信号输出。 Cas12a 反应产生的信号根据所使用的单链探针不同，用荧光检测仪进行定性、定量测定。 5 试剂和材料 除非另有说明，在分析中使用确认为分析纯的试剂和无核酸酶水。 5.1磁珠法动物组织基因组 DNA提取试剂盒1。试剂盒包括： a）组织消化液 GHA b）缓冲液 GHB c）缓冲液 GDA 1 磁珠法动物组织基因组 DNA提取试剂盒是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采 用其他产品提取动物组织中基因组 DNA，经本文件规定的 CRISPR法检测可以得到相同或更好的检测效果，经实验评估 后可以使用这些等效产品。 全国团体标准信息平台