ICS 67. 050 CCS X 16 团 体 标 准 T/CIQA 112 - 2025 动物源性食品 中牛、羊和猪源性成分定性检测方 法 CRISPR 法 Determination of ingredients of cattle, sheep and pig in animal food – CRISPR method 2025 -04-25 发布 2025 -04-25实施 中国出入境检验检疫协会 发布 全国团体标准信息平台 目 次 前言……………………………………………………………………………… ……………………… I 1范围…………………………………………………………………………………………………… 1 2规范性引用文件……………………………………………………………………………………… 1 3缩略语…………………………………………………………………………………………… 1 4原理………………………………………………………………… …………………… ……… 1 5试剂和材料 ………………………………………………………………………………………… 1 6仪器和耗材 ………………………………………………………………………………………… 2 7试样制备 ………………………………………………………………………………………… 2 8试验步骤 ………………………………………………………………………………………… 3 9结果计算 ……………………………………………………………………………………………… 4 10 质量控制 ……………………………………………………………………………………………… 4 11 检测结果判定和表述 ………………………………………………………………………………… 4 12 结果报告 ……………………………………………………………………………………………… 4 13检测过程中防止交叉污染的措施 …………………………………………………………………… 4 附录A（资料性）牛、羊和猪源性成分 RPA扩增参考序列 ………………………………………… 5 全国团体标准信息平台 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会（ CIQA/TC10 ）提出并归口。 本文件起草单位： 南京师范大学、杭州努咖智能科技有限公司、努咖智能科技 (扬州)有限公司、中 国农业科学院深圳农业基因组研究所 (岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心 )、上海市生 物医药技术研究院 本文件主要起草人： 吴丽娜、唐进、徐晴、李亚楠、孟伶通、徐诗琦、王鑫杰、黄行许、李广磊、 周建奎、梁启 本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目的， 印制、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字 。 全国团体标准信息平台 T/CIQA 112-2025 1 动物源性食品 中牛、羊和猪源性成分定性检测方法 CRISPR法 1 范围 本文件描述了动物源性食品 中牛、羊和猪源性成分的 CRISPR检测方法。 本文件适用于 动物源性食品 中牛、羊和猪源性成分的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ，注日期的引用文件 ， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 -2008 实验室质量控制规范食品分子生物学检测 GB/T 24777 -2009 化学品理化及其危险性检测实验室安全要求 SN/T 5624 -2023 检测实验室质量安全风险管理 通则 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 crRNA：规律间隔成簇短回文重复序列核糖核苷酸（ CRISPR RNA ） CRISPR：规律间隔成簇短回文重复序列（ Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats ） RPA：重组酶聚合酶扩增（ recombinase polymerase amplification ） tracrRNA ：反式激活 CRISPR RNA （trans -activation CRISPR RNA ） 4 原理 通过 CRISPR方法对动物产品中牛、羊和猪源性成分 开展定性检测。首先采用 RPA进行牛、羊和猪 源性基因特异性扩增 ，再用 CRISPR反应特异性切割扩增产物 ，观察荧光值增量并给出结果判定。 5 试剂和材料 除另有规定外 ，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合 GB/T 6682 二级水的要求。 所有试 剂均用无 DNA/RNA 酶污染的容器分装。 5.1 裂解液：20 g/L 十六烷基三甲基溴化铵 , 1.4 mol/L 氯化钠 , 0.1 mol/L 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 , 0.02 mol/L 乙二胺四乙酸二钠二水合物 , pH调至 8.0。 5.2 三氯甲烷。 5.3 异戊醇。 5.4 异丙醇。 5.5 乙醇。 全国团体标准信息平台