ICS 67.020.10 CCS CFNA X 40 团体 标准 T/CFNA 6502—2024 胡椒及其制品中胡椒碱的含量测定 Determination of piperine content in pepper （Piper nigrum L. ）and its preparation 2025 - 02 - 11发布 2025 - 03 - 10实施 中国食品土畜进出口商会 发布 全国团体标准信息平台 T/CFNA 6502 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本标准根据美国美国调味品协会 ASTA ANALYTICAL METHODS Method 12.1 - Piperine Content of Black and White Pepper, Their Oleoresins and Soluble Pepper Seasonings 原理方法重新起草 。 本文件由中国食品土畜进出口商会提出。 本文件由中国食品土畜进出口商会归口。 本文件起草单位： 四川美料美味食品科技有限公司、山东百佳食品有限公司、山东恋味食品有限公 司、陕西宏达香料科技有限公司、山东一品农产集团有限公司、梧州海关综合技术服务中心、山东农业 大学、山东万兴调味品有限公司、山东泰山立福食品科技有限公司、青岛柏兰集团有限公司、河北乾亿 食品有限公司、 江苏福多美生物科技有限公司、 乐陵市腾达辣椒制品有限公司、 小熊驾到股份有限公司、 海南星汇达现代农业科技有限公司、玉林福达香料股份有限公司、山东百佳调味品有限公司、邢台百佳 食品有限公司、通标标准技术服务（青岛）有限公司、欧陆分析检测技术服务（青岛）有限公司、海乐 香辛料（济南）有限公司、济南海关、聊城海关、英联食品投资（中国）有限公司、宏芳生物科技 (昆 山)有限公司、玉林市食品药品检验检测中心。 本文件起草人： 吴耀军、刘继华 、刘桂宁 、崔培恩、王丽华、 苏晨、苏绍涛、刘峰、孙秀东、李漪、 袁秉康、李琴、张春、叶萌、蒋国豪、张明月、邓世军、王丽华、周娟妮、曹梦辉、赵振科、张春梅、 乔旭光、卢晓明、李宁阳、郑振佳、陈宇、杨清山、马永勇、姜财勇、王吉盈、张凯、杨少杰、文旭娟、 牛亚鑫、毛学军、李伟、韦伟、刘伟、朱秀焕、周雪明、谢辉 、姜绍东、刘洪耀 。 全国团体标准信息平台 T/CFNA 6502 —2024 1 胡椒及其制品中胡椒碱的含量测定 1 范围 本标准适用于 胡椒及其 制品中胡椒碱的含量测定 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 12729.3 香辛料和调味品 分析用粉末试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法原理 用紫外分光光度法测定胡椒 及其制品 中胡椒碱的含量。 使用乙醇甲醇混合 溶液提取样品中的 胡椒碱， 在342 nm-345 nm之间的最大吸波长处测量吸光度 值。 5 试剂 95%乙醇，分析纯。 甲醇，分析纯。 乙醇-甲醇混合液： 5 mL甲醇（5.2）加入100 mL乙醇（5.1）中，混匀。 胡椒碱标准物质：直接购买市售有证标准物质。 5.4.1 胡椒碱标准储备液： 准确称取 100.00 mg胡椒碱标准品，置于 100 mL容量瓶中，加入 适量乙醇- 甲醇混合液 （5.3）溶解后，用 乙醇-甲醇混合液（ 5.3）定容至刻度，摇匀， 备用。 5.4.2 胡椒碱标准中间液： 准确移取胡椒碱储备液 （5.4.1）1 mL，置于100 mL容量瓶中， 用乙醇-甲 醇混合液（ 5.3）稀释至刻度，摇匀， 该溶液现配现用。 6 仪器 分析天平 ：精确度为 0.0001 g。 紫外分光光度计 ：波长200 nm-400 nm,配备1 cm石英比色皿。 实验室常用玻璃器皿。 7 分析步骤 黑胡椒和白胡椒前处理 7.1.1 制样 按GB/T 12729.3规定执行。 7.1.2 提取 准确称取混匀的样品粉末 (过孔径250μm筛)0.5 g，置于125 mL锥形瓶中，加入 70 mL乙醇-甲醇混合 液（5.3），水浴回流 1 h，冷却至室温，过滤至 200 mL容量瓶中，滤渣用 乙醇-甲醇混合液（ 5.3）洗涤， 全国团体标准信息平台 T/CFNA 6502 —2024 2 合并洗涤液 于容量瓶中，用 乙醇-甲醇混合液（ 5.3）定容至刻度 ，摇匀。准确移取上述溶液 5 mL置于100 mL容量瓶中，用 乙醇-甲醇混合液（ 5.3）定容至刻度，摇匀， 15 min.内上机测定 吸光度值。 胡椒油树脂的前处理 准确称取1 g充分混匀的样品置于 100 mL棕色容量瓶中，用 乙醇-甲醇混合液（ 5.3）定容至刻度，摇 匀，备用。准确 移取10 mL上述样品，置于 100 mL容量瓶中，用 乙醇-甲醇混合液（ 5.3）定容至刻度，摇 匀，再准确移取 1 mL，置于100 mL容量瓶中，用 乙醇-甲醇混合液（ 5.3）定容至刻度，摇匀， 15 min.内 上机测定 吸光度值。 测定 7.3.1 标准曲线建立 准确移取胡椒碱标准品中间液 （5.4.2）0.00 ml、1.00 ml、2.00 ml、3.00 ml、4.00 ml、5.00 ml、 6.00 mL，分别置于10 mL容量瓶中， 用乙醇-甲醇混合液（ 5.3）稀释至刻度，摇匀， 标准中间液浓度分 别为0.00 μg/mL、1.00 μg/mL、2.00 μg/mL、3.00 μg/mL、4.00 μg/mL、5.00 μg/mL、6.00 μg/mL。使用 1 cm石英比色皿，以乙醇 -甲醇混合液（ 5.3）调零，以乙醇-甲醇混合液（ 5.3）作参比， 在343 nm的最 大吸收波长 下，测定系列标准品工作液的吸光度 值，记为A1、A2、A3、A4、A5、A6，根据公式 （1）换 算成1 µg/mL时胡椒碱的平均吸光度 值Aa。 7.3.2 试样测定 使用1 cm石英比色皿，以乙醇 -甲醇混合液（ 5.3）调零，用乙醇-甲醇混合液（ 5.3）作参比， 在343 nm的最大吸收波长 下，测定 试样（7.1.2）、试样（ 7.2）的吸光度值。 8 结果计算与表示 结果计算 1 µg/mL时胡椒碱的平均吸光度 值Aa按照公式（ 1）计算： Aa=(A1 1＋A2 2＋A2 3＋A4 4＋A5 5＋A6 6)÷6 ································ ················ (1) 胡椒碱含量 %按照公式（ 2）计算： 胡椒碱 %=𝐴𝑠 𝐴𝑎×𝑓 𝑊𝑠×106×100 ································ ······················· (2) 式中：As—样品溶液吸光度值； Aa—1 μg/ml时胡椒碱溶液的平均吸光度 值； f—稀释因子 ； Ws—样品质量，g。 结果表示 计算结果保留两位有效数字。 9 精密度 同一样品在相同 条件下获得的两次独立测定结果的 胡椒碱标准偏差应小于 8%。 10 特别提示 本方法测定的包括胡椒碱异构体和相关化合物（如有）的吸光度 值，包括胡椒碱和次胡椒酰胺， 它们在所测波长下具有吸光度，但不像胡椒碱那样辛辣。分析过程中使用 铝箔或黑纸将烧瓶包裹起来， 并尽快做测定， 能减少这类化合物的形成，并防止样品刺激性 物质的增加给测定结果造成影响。 全国团体标准信息平台