ACSSICS 65.160 CCS x87 团 体 标 准 优质抗病大粒型水稻两系不育系 选育技术 规程 2025 - 03 - 15 发布 2025 -04 - 01 实施 安徽省作物学会 发 布 T/ACSS 001-2025 T/ACSS 全国团体标准信息平台 ACSST/ACSS 001-2025 1 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省农业科学院水稻研究所提出并归口。 本文件起草单位：安徽省农业科学院水稻研究所，安徽农业大学，安徽省农业技术推广总站，黄山 市农业技术推广中心。 本文件主要起草人：从夕汉、杜弘杨、石英尧、孔令娟、汤雷、罗彦长、施伏芝、罗玉祥、阮新民、 罗志祥。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 ACSST/ACSS 001-2025 2 优质抗病大粒型水稻两系不育系选育技术规程 1 范围 本文件规定了优质抗白叶枯、稻瘟病、大粒型水稻两系不育系选育过程中的引物序列、目标基因分 子标记辅助选择、选育技术等要求。 本文件适用于长江中下游优质抗病大粒型水稻两系不育系早代分子标记辅助选育及后代大田选择。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 (包括所有的修改单) 适用于 本文件。 GB/T 19557.7 植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南水稻 NY/T 1300 农作物品种试验与信息化技术规程水稻 NY/T593 食用稻品种品质 NY/T 1215 水稻光、温敏雄性核不育系育性鉴定规程 DB52/T 1501.1 农作物抗病性鉴定技术规范第 1部分水稻抗稻瘟病 DB32/T 1122 水稻品种（系）抗白叶枯病鉴定方法与抗性评价技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 长日高温 光照时间 ≥13.5h，日平均温度 ≥23.5℃ 3.2 短日低温 光照时间 ≤13.5h，日平均温度 ≤23.5℃ 3.3 大粒型两系不育系 千粒重 ≥25g 3.3 一般配合力（SCA ） 一个亲本（纯系、自交系或品种）在多种杂交组合中所表现出来的平均效应。 4仪器设备及试剂 4.1 仪器设备 全国团体标准信息平台 ACSST/ACSS 001-2025 3 水浴锅、台式高速冷冻离心机，电泳槽和电泳仪，振荡器，电子天平，凝胶成像仪， -20℃冰箱， 水平摇床，移液器、 PCR仪、微波炉、高压灭菌锅。 4.2 试剂 Tris碱，硼酸， EDTA-Na ₂H₂O，5000bp DNA Marker ，50bp DNA Marker ，NaOH，NaCl，氯仿：异 戊醇（24 ：1），异丙醇，无水乙醇， 75%无水乙醇， SDS，二甲苯氰，溴酚蓝，去离子甲酰胺， 2Taq Master Mix (Dye Plus) ，6×LoadingBuffer ，丙烯酰胺， N、N- 亚甲基双丙烯酰胺， AgNO ₃，琼脂糖，超 纯水，尿素，溴化乙锭， TEMED，AP，过硫酸铵，甲醛。 5 溶液配制 溶液配制方法参考《分子克隆实验指南（第四版）》。 6引物序列 通过比对抗稻瘟病、抗白叶枯病、粒宽、糊化温度等基因序列，设计特异引物。表1是 GW8、Xa39、 Pita、ALK等部分基因的引物序列。 表1 各基因对应的分子标记 基因 引物 序列 GW8 GW8-F 5‘ -TTTCAGTGTCCTCCTGTCTG-3’ GW8-R 5‘ - ACCACTAAACCAGGTGCTAC-3’ Xa39 Xa39-F 5‘ -CACAAGACAACCTTCAATGG-3’ Xa39-R 5‘ -GGCTTAGGAGCGTTTATAGG-3’ Pita Pita-F 5‘ -ACTTCATGTT TGTCTGTACA GCA-3’ Pita-R 5‘ -TCAAACAATC ATCAAGTCAG-3’ ALK ALK-F 5‘ -ACTTTTAGTTCAGCAA TTTCTC-3’ ALK-R 5‘ -ACACAAAAAAAGTACTCCCCGGCC-3’ 7目标基因分子标记辅助选择 7.1基因组提取 基因组 DNA提取等技术均参照《分子克隆试验指南（第四版）》。 7.2 PCR 扩增 利用PCR 仪进行 PCR扩增， PCR反应体系为 10 μL，包含 20 ng ·uL-1模板 DNA 1 μL，25 mmol ·L-1 MgCl2 0. 6 μL，2 pmol ·uL-1引物 0. 7 μ L，2. 5 mmol ·L-1 dNTP 0. 2 μL，10 × buffer 缓冲液 1 μL，5 U·μL-1 Taq DNA 聚合酶 0. 1 μL，ddH2O 6. 4 μL。反应在 PTC2000 （MJ Research Inc1，USA ）等PCR 仪上进 全国团体标准信息平台