ICS 65.020.01 B 10 备案号：59985-2018 内 蒙 DB15 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1476—2018 液相色谱-串联质谱法 测定土壤及马铃薯中 9 种种衣剂的残留量 Detection of 9 seed-coating agents residues from seed coating reagent in soil and potato by LC-MS-MS 2018-08-15 发布 内蒙古自治区质量技术监督局 2018-11-15 实施 发 布 DB15/T 1476—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。 本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本标准起草人：张福金、张欣昕、姚一萍、李国银、王雪娇、尹鑫、李秀萍、崔艳、骆洪。 I DB15/T 1476—2018 液相色谱-串联质谱法 测定土壤及马铃薯中 9 种种衣剂的残留量 1 范围 本标准规定了土壤和马铃薯中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜 灵和甲基托布津残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。 本标准适用于土壤中和马铃薯中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲 霜灵和甲基托布津残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8855 新鲜水果和蔬菜的取样法 NY/T 52 土壤水分测定法 NY/T 1121.1 土壤检测 第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存 3 原理 试样中种衣剂残留物经乙腈提取，用键合硅胶吸附剂固相分散剂净化后，用液相色谱-串联质谱进 行测定，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 除另有规定外, 本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 乙腈：色谱纯 4.3 甲酸：色谱纯 4.4 氯化钠：分析纯 4.5 无水硫酸镁：分析级，研磨后在 500 ℃马弗炉内烘干，置于干燥器中保存。 4.6 0.1 % 甲酸溶液（体积分数） ：取 0.1 mL 甲酸加水稀释至 100 mL。 4.7 0.1 % 甲酸水-甲醇溶液（90+10，体积比） 。 4.8 标准品 1 DB15/T 1476—2018 噻虫嗪、多菌灵、克百威、3-羟基克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托不 津标准品：纯度大于98 % 4.9 标准溶液 4.9.1 标准储备液 准确称取适量的噻虫嗪、多菌灵、克百威、3-羟基克百威灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜 灵和甲基托布津标准品，用甲醇分别配制成100 mg/L的标准储备液，保存于-18 ℃冰箱内，可使用6个 月。 4.9.2 混合标准储备液 分别准确吸取1.00 mL 噻虫嗪、多菌灵、克百威、3-羟基克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑 醇、甲霜灵和甲基托布津标准储备液至10 mL容量瓶内，用甲醇稀释定容至刻度，配制成10 mg/L的混 合标准储备液，于-18 ℃冰箱内避光保存，可使用3个月。 4.9.3 基质混合标准工作液 根据需要，用阴性样品基质系列稀释混合标准工作液，使用前临时配制。 4.10 键合硅固相萃取吸附剂：C18，15 mm ； PSA，0.15 mm。 4.11 微孔过滤膜（尼龙）：13 mm ×0.2 µm。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI） 。 5.2 分析天平：感量 0.01 mg 和 0.01 g。 5.3 离心机：转数 6000 r/min 以上。 5.4 涡旋混合器。 6 试样制备和保存 按照NY/T 1121.1 中有关规定采集土壤，去杂质后充分混匀，保存在-18 ℃冷冻冰箱中。按照NY/T 52 标准要求，取新鲜土壤，105±2 ℃烘干冷却称重，测定土壤的水分含量（a） ，在计算时土壤换算至 烘干的水分换算系数F（F=1-a） 。 按照GB/T 8855 标准要求，取样的马铃薯样品切碎、混匀、匀浆、密封，作为试样。将试样保存在 -18 ℃冷冻冰箱中。 7 测定步骤 7.1 提取 7.1.1 马铃薯样品 2 DB15/T 1476—2018 称取10 g试样(精确到0.01 g)于50 mL离心管中，加入10.0 mL乙腈（4.1），涡旋振荡0.5 min，超 声提取10 min，再加入1 g氯化钠（4.3），4 g无水硫酸镁（4.4），涡旋混合1 min后，以6000 r/min 的转速离心5 min，取上层有机相净化。 7.1.2 土壤样品 称取10 g新鲜试样(精确到0.01 g)于50 mL离心管中，加入10.0 mL乙腈（4.1）和5 mL水，涡旋振 荡0.5 min，超声提取10 min，再加入1 g氯化钠（4.3），4 g无水硫酸镁（4.4），涡旋混合1 min后， 以6000 r/min的转速离心5 min，取上层有机相净化。 7.2 净化 7.2.1 马铃薯样品 移取提取液2 .00 mL于5 mL离心管中，加入150 mg无水硫酸镁（4.4），50 mg C18（4.9），涡旋 混合1 min后，以6000 r/min的转速离心1 min。取上清液，用0.1 %的甲酸水-甲醇溶液（4.6）稀释定 容至5.0 mL，过0.2 µm微孔过滤膜，待测。 7.2.2 土壤样品 移取提取液2 .00 mL于5 mL离心管中，加入150 mg无水硫酸镁（4.4），25 mg C18（4.9），25 mg PSA（4.9）。涡旋混合1 min后，以6000 r/min的转速离心1 min。取上清液，用0.1% 的甲酸水-甲醇溶 液（4.6）稀释定容至5.0 mL，过0.2 µm微孔过滤膜，待测。 7.3 阴性样品提取液的制备 取不含待测物的阴性马铃薯和土壤样品，按7.1和7.2步骤制备阴性样品提取液，用于配制基质混合 标准工作液。 7.4 测定 7.4.1 液相色谱-质谱法测定条件 具体如下: a) 色谱柱：C18，100 mm × 2.1 mm（内径），粒径，1.7 µm； b) 流动相：A：0.1 %甲酸溶液（4.5），B：乙腈（4.1），梯度洗脱见表 1； 表 1 梯度洗脱表 c) d) e) f) 时间 / min 流速/（mL/min） A / % B / % 0.00 0.35 90 10 2.00 0.35 70 30 3.00 0.35 10 90 5.50 0.35 10 90 6.50 0.35 90 10 柱温：40 ℃； 进样量：1 µL； 离子源：电喷雾（ESI）； 扫描方式：正离子扫描模式； 3 DB15/T 1476—2018 g) h) i) j) k) l) m) 检测方式：多反应监测（MRM）； 电离电压：2500 V； 离子源温度：120 ℃； 雾化温度：450 ℃； 锥孔气流速：50 L/h； 雾化气流速：650 L/h； 待测物保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量见表 2。 表 2 9 种种衣剂保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量 待测物名称 保留时间 min 定性离子对 定量离子对 m/z 噻虫嗪 2.15 多菌灵 1.41 克百威 3.33 3-oh 克百威 2.53 灭多威 1.88 吡虫啉 2.61 嘧菌酯 3.60 戊唑醇 3.71 甲霜灵 3.43 甲基托布津 3.24 锥孔电压 m/z 291.9>211.0 291.9>131.8 192.1>132.1 192.1>160.1 222.2>123.1 222.2>165.1 238.3>163.2 238.3>181.2 163.0>88.2 163.0>106.1 256.1>175.1 256.1>209.2 404.1>344.1 404.1>372.1 308.1>70.1 308.1>124.9 280.0>192.0 280.0>220.0 343.1>150.9 343.1>311.1 V 291.9>211 15 192.1>160.1 25 222.2>165.1 25 238.3>181.2 20 163.0>88.2 5 256.1>209.2 25 404.1>372.1 25 308.1>70.1 20 280.0>192.0 20 343.1>150.9 25 碰撞电压 V 12 30 30 15 20 12 15 10 8 10 20 20 24 15 20 30 10 20 20 15 7.4.2 定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果样品中待测物质的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时 间相差在±2.5% 以内，且样品色谱图中定性离子的相对离子丰度与浓度相近的基质标准工作液色谱图 中对应的定性离子相对丰度进行比较，相对偏差不超过表3 规定的范围，则可判定样品中存在该种待测 物。 表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差（%） 相对离子丰度 K> 50 20＜K＜50 10＜K＜20 K≤10 允许最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.3 定量测定 4 DB15/T 1476—2018 在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作液（4.8.3）进行色谱分析，以峰面积为纵坐标，基 质混合标准工作液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，基质混合标准工 作液和试样中响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱和质谱条件下，基质混合标准工作液中 的各特征离子多反应监测（MRM）色谱图参见附录A中的图A.1。 7.5 空白实验 按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.6 空白试验 除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。 8 结果计算 试样中待测组分的测定结果可由仪器工作软件计算，马铃薯样品中待测组分可按式（1）计算，土 壤样品中待测组分可按式按式（2）计算： X  c  V  V1  1000…………………………（1） m V2 1000 式中： X ――― 试样中待测组分残留量，µg/kg； c ――― 从标准曲线得到的试样中待测组分的浓度，µg/L； V ――― 试样溶液定容体积，mL； V1――― 试样