ICS 65.020.40 B 61 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 2724—2018 有髯鸢尾工厂化育苗生产技术规程 2018 - 04 - 09 发布 河北省质量技术监督局 2018 - 05 - 09 实施 发 布 DB13/T 2724—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北省林业厅提出。 本标准起草单位：河北省林业科学研究院。 本标准主要起草人：尹新彦、储博彦、李金霞、赵玉芬、张全锋、王鑫、张鑫、贾红姗、庞曼、 杨小兵、徐立军、张琛、田静、杜娟、杨丽、宋平。 I DB13/T 2724—2018 有髯鸢尾工厂化育苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了有髯鸢尾（Beared Irises）工厂化育苗生产的术语和定义、一般性要求、种苗组培快 繁、组培穴盘苗生产、组培裸根苗生产、苗木质量标准，以及包装和运输等技术要求。 本标准适用于有髯鸢尾工厂化育苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 2234-2013 林业机械 林业工厂化育苗 育苗穴盘 NY/T 2118-2012 蔬菜育苗基质 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 NY/T 2312-2013 茄果类蔬菜穴盘育苗技术规程 DB13/T 605-2005 花卉组培苗 生产技术规程 DB13/T 1036-2009 德国鸢尾种苗生产技术规程 3 术语和定义 NY/T 2306-2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 有髯鸢尾 垂瓣上有髯毛附属物的鸢尾的统称。 3.2 幼嫩花序 花葶抽出后，花蕾长至1cm～2 cm的花序。 3.3 幼芽 秋天萌生未出土，用于组织培养外植体的芽。 3.4 组培裸根苗 移栽到种植筐（床）中培育的组培苗。 1 DB13/T 2724—2018 4 一般性要求 4.1 组培工厂的设计要求、所需设备、器材及试剂 4.1.1 工厂设计要求 按照 NY/T 2306-2013 中4执行。 4.1.2 所需设备 除NY/T 2306-2013附录B的要求外，还应增加其他设备，见表1。 表1 组培工厂所需增加设备及说明 仪器设备名称 年生产规模，万株 自动洗瓶机 培养基自动定量灌 装机 50 100 200 1 1 1 1 1 1 规格型号 滚筒式，适用于20 mL～1000 mL，每分钟30 瓶～80 瓶； 1.5 KW；耗水量每小时0.6 t～1 t 用途说明 清洗培养瓶 50 L，310 W；不锈钢；装罐量10 mL～500 mL；工作量： 培 养 基 配 置 与 灌 90 mL/瓶，20次/min；液体温度≤95℃ 装 4.1.3 所需试剂 除NY/T 2306-2013附录D的要求外，还应增加多效唑（英文名称：paclobutrazol；分子式C15H20ClN3O； 分子量293.79；保存方法：室温、阴凉干燥、避免直射光、通风良好）。 4.2 培养容器和接种器械的清洗 按照 NY/T 2306-2013 中6执行。 4.3 培养基选择与母液配制 4.3.1 培养基选择 以NY/T 2306-2013附录F中MS为基本培养基。根据有髯鸢尾不同品种和不同外植体选择合适的培养 基种类和植物生长调节剂配比，见附录A。 4.3.2 基本培养基母液配制和保存 按照 NY/T 2306-2013 附录G执行。 4.3.3 植物生长调节剂的母液配制和保存 按照 NY/T 2306-2013 附录H执行。 4.4 培养基制作 4.4.1 配制 根据培养基成分准备好蒸馏水、琼脂、砂糖和各类母液等。制作1 L培养基加蒸馏水700 mL（按所 需容量的70 %左右），再加入琼脂6 g～9 g，加热搅拌使琼脂融化。加砂糖30 g，糖溶解后，根据预 配母液取量，添加一定量的细胞分裂素（6-BA），并充分搅拌均匀后，加蒸馏水定容至1 L。用pH计或 2 DB13/T 2724—2018 pH试纸测pH值，用0.1 mol/L的HCl或NaOH溶液调节培养基pH值为5.8～6.0。生产中根据所需容量按比 例配置。 4.4.2 分装 用量以不同规格培养瓶不同，以距瓶底厚度1 cm±0.1 cm为宜。分装培养基时勿将培养基沾在培养 瓶瓶口。分装完成后，注明培养基编号及配制日期。 4.4.3 高压灭菌 2 2 培养基分装后应在10 h内进行湿热灭菌；灭菌条件一般在1.1 kg/cm ～1.2 kg/cm 、121℃以下， 灭菌18 min。 4.4.4 贮存 灭菌后的培养基放至室温后，储存于培养基储藏室内，存储时间不应超过7 d。 4.5 接种操作 按照 NY/T 2306-2013 中10执行。 4.6 培养室操作 -2 -1 按照 NY/T 2306-2013 中11执行。其中培养室温度控制在18℃±2 ℃，光照强度20μmol·m ·s ～100 -2 -1 μmol·m ·s ，光照时间每天10 h～12 h。 5 种苗组培快繁 5.1 种苗组培快繁规模化生产工艺流程图 有髯鸢尾种苗组培快繁规模化生产工艺流程图见附录B。 5.2 品种选择 选择抗逆性强，观赏价值高，市场流行或具有市场潜力的品种，参见附录C。 5.3 母本材料保存 将通过引进或选育获得的有髯鸢尾母本分品种进行露地栽植。采用1.5 m～2.0 m宽，30 cm高的高 畦种植，花期前后加强肥水管理。夏季控制水分供应，雨天前后采取措施，预防软腐病。 5.4 外植体采集、消毒与接种 5.4.1 外植体采集 在健康的有髯鸢尾植株上，春季选取幼嫩花蕾、幼嫩花序轴上带节点区段，秋季选取幼芽做外植 体。幼嫩花蕾、幼嫩花序的采集宜在晴天午后或植物表面露水干后，幼芽采集不受时间限制。 5.4.2 外植体消毒 按照 DB13/T 605-2005 中6.2.2执行。 5.4.3 外植体接种 3 DB13/T 2724—2018 在超净工作台上用手术刀和镊子将外植体切割成所需大小。花蕾切去顶部，留花托近1.0 cm左右， 纵切为2块。幼嫩花序轴上带节点区段要求保留0.5 cm～1.0 cm；幼芽要求带基部保留1.0～1.5 cm。 将外植体接种到初代培养基上。1瓶接种1个外植体。将品种代号、培养基类型、接种人员以及接种日 期标示到瓶上。 5.5 初代培养 外植体在初代培养基培养1周后，外植体基部开始膨大。培养3周后，形成淡黄（或浅绿）光滑的 愈伤组织或不定芽。 5.6 增殖培养 将不定芽不断转接到增殖培养基中进行培养。每3周继代1次，初代培养以后的继代次数控制在10 代～15代，增殖系数宜控制在3～5。200 mL的培养瓶接种数量为每瓶5块，排放均匀、整齐。 5.7 生根培养 根据生产需求，当继代培养的组培苗达到一定规模后，剪取或切取生长健壮、叶色正常、叶片舒 展、高度2 cm左右带3芽～4芽的丛生芽无根苗，无根苗接种在生根培养基上。200 mL的培养瓶接种数 量为每瓶5丛。培养15～20 d，幼苗基部长出3条～5条2 cm～3 cm的新根时即可进行移栽。 5.8 炼苗 -2 -1 -2 -1 将培养瓶置于有散射光60 μmol·m ·s ～100 μmol·m ·s 的温室中，温度控制在23℃±2℃，经过0 d～ 4 d的封口锻炼后，进入移栽阶段。 5.9 种质资源离体保存 5.9.1 保存材料与保存容器 根据市场需求暂时不进行大规模扩繁的品种，以增殖继代的试管苗为保存材料，采用规格为直径 18 mm～25 mm，高160 mm～180 mm的试管，用内置硅胶圈的密封塑料盖封口，用标签写明种质编号。 5.9.2 保存条件 -2 -1 将离体保存材料接种于种质保存培养基上，保存温度（5℃±1℃，光照强度10 μmol m ·s ～20 μmol -2 -1 m ·s ，光照时间每天10 h。每管加培养基15 mL～20 mL。 5.9.3 保存数量 每份种质保存10管以上，每管1个丛芽。 5.9.4 继代周期 每12个月～15个月继代1次。 5.10 种质恢复 根据生产需求，将保存的种质重新接种到继代培养基上。操作同5.6。 6 组培穴盘苗生产 4 DB13/T 2724—2018 6.1 穴盘选择 育苗穴盘选择型号2P□X-50 PS吹塑穴盘，穴盘长540 mm、宽280 mm、高85 mm。 6.2 穴盘消毒 按照NY/T 2312-2013中5.2.3.2执行。 6.3 基质配置 选择洁净、消过毒的混凝土地面或基质搅拌机，将草炭、珍珠岩、蛭石按3:1:1均匀混拌，并符合 NY/T 2118-2012的要求。 6.4 基质填装 填装方法按照NY/T 2312-2013中5.3.2执行。填装完毕，用80%多菌灵可湿性粉剂0.5 g/L溶液或 0.3 %～0.5 %高锰酸钾溶液喷透后再用清水冲淋，控水备用。 6.5 试管苗处理 用镊子从瓶中轻轻取出生根苗，放在盛有20℃左右的清水中，用毛刷将附着在根上的培养基刷洗 干净，注意不能伤根，然后在80%多菌灵杀菌剂0.5 g/L的溶液中浸泡3 min～5 min。 6.6 移栽 用不锈钢叉或2 cm宽竹片在填装好基质的穴盘上打长、宽各2 cm左右，深3 cm～4 cm的孔，将组 培苗的根顺延下去，基质以刚盖过组培苗基部为宜，稍压实，以幼苗不倒即可。移栽后用细喷雾器喷 水，使根系和基质紧密接触。 6.7 摆放 穴盘苗分品种、移栽日期，在苗床上整齐摆放。插牌注明品种和日期。 6.8 管理 6.8.1 温湿度、光照、浇水、施肥 按照NY/T 2306-2013执行。 6.8.2 病虫害防治 参见附录D。 7 组培裸根苗生产 7.1 栽植设施 栽植设施可用种植筐长×宽×高（50 cm×70 cm×20 cm）或在温室内做宽100 cm～120 cm种植池， 长度根据实际需要而定。 7.2 基质准备 5 DB13/T 2724—2018 移栽基质可用蛭石或珍珠岩。将基质填入栽植设施内，厚度15 cm。用80 %多菌灵可湿性粉剂0.5 g/L 溶液或0.3 %～0.5 %高锰酸钾溶液喷透后再用清水冲淋备用。 7.3 试管苗处理 试管苗处理同7.6。 7.4 移栽 将洗净的组培苗在栽植筐（床）上按条行栽植，株行距均为5 cm～7 cm。移栽方法同7.7。 7.5 管理 管理同7.9。 8 苗木质量标准 8.1 组培穴盘苗 8.1.1 株形 植株挺拔。叶基生、剑形，呈扇形排列，淡绿色、灰绿色或深绿色，常具白粉，无黄叶现象