(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111503157.2 (22)申请日 2021.12.09 (66)本国优先权数据 202110590801.8 2021.0 5.28 CN (71)申请人 南京北恒生物科技有限公司 地址 210061 江苏省南京市江北新区探 秘 路73号树屋十六栋B1-2 (72)发明人 周亚丽　陈功　任江涛　贺小宏　 王延宾　韩露　 (74)专利代理 机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 3210 3 专利代理师 范晴 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 16/46(2006.01)C07K 19/00(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) G01N 33/574(2006.01) (54)发明名称 靶向Claudi n18.2的纳米抗体及其用途 (57)摘要 本发明提供靶向Claudin18.2的纳米抗体及 其 编 码 核 酸 序 列 。本 发 明 还 提 供 包 含 Claudin18.2纳米抗体的多特异性抗体、 嵌合抗 原受体、 抗体偶联物， 包含它们的药物组合物和 试 剂盒 ， 以 及 它们在诊断 /治疗/预防 与 Claudin18.2表达相关的疾病中的用途。 权利要求书2页 说明书17页 序列表21页 附图4页 CN 115403671 A 2022.11.29 CN 115403671 A 1.一种结合Claudin18.2的人源化纳米抗体， 其由三个互补决定区CDR1、 CDR2和CDR3和 四个框架区FR1、 FR2、 FR3和FR4组成， 其中CDR1如SEQ  ID NO： 1所示， CDR2如SEQ  ID NO： 2所 示， CDR3如SEQ  ID NO： 3所示， FR1选自SEQ  ID NO： 4、 8或其变体， FR2选自SEQ  ID NO： 5、 9或 其变体， FR  3选自SEQ  ID NO： 6、 11、 12、 13或其变体， FR4选自SEQ  ID NO： 7、 10或其变体， 所 述变体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的保守性 替换。 2.权利要求1所述的纳米抗体， 其包 含： (1)如SEQ  ID NO： 4所示的FR1、 如SEQ  ID NO： 5所示的FR2、 如SEQ  ID NO： 6所示的FR3、 如SEQ ID NO： 7所示的FR4， 或其变体， 所述变体在所述FR 中包含至多3个氨基酸的保守性替 换； (2)如SEQ  ID NO： 8所示的FR1、 如SEQ  ID NO： 9所示的FR2、 如SEQ  ID NO： 6所示的FR3、 如SEQ ID NO： 10所示的FR4， 或其变体， 所述变体在所述FR中包含至多3个氨基酸的保守性 替换； 或 (3)如SEQ  ID NO： 4所示的FR1、 如SEQ  ID NO： 5所示的FR2、 如SEQ  ID NO： 11、 12或13所 示的FR3、 如SEQ  ID NO： 10所示的FR4， 或其变体， 所述变体在所述FR中包含至多3个氨基酸 的保守性 替换。 3.权利要求1所述的纳米抗体， 其 中所述纳米抗体与选自SEQ  ID NO： 15‑18的氨基酸序 列具有至少90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 99％、 100％序列同一性， 并且能够特异性结合Claudi n18.2抗原。 4.一种编码权利要求1 ‑3任一项所述的纳米抗体的核酸分子 。 5.权利要求4所述的核酸分子， 其与选自SEQ  ID NO： 20‑23的核苷酸序列具有至少 90％、 91％、 9 2％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 9 9％、 100％序列同一 性。 6.一种多特异性抗体， 其包含权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体， 和一个或多个与其 他抗原特异性结合的第二 抗体或其 抗原结合部分。 7.权利要求6所述的多特异性抗体， 其中所述第二抗体或其抗原结合部分选自全长抗 体、 Fab、 Fab'、 (Fab')2、 Fv、 scFv、 scFv ‑scFv、 微抗体、 双抗体、 纳米抗体或sdAb。 8.一种载体， 其包含编码权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体或权利要求6或7所述的 多特异性 抗体的核酸分子 。 9.一种宿主细胞， 其表达权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体或权利要求6或7所述的 多特异性 抗体。 10.一种嵌合抗原受体， 其包含权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体或权利要求6或7所 述的多特异性 抗体、 跨膜结构域和胞内信号传导结构域。 11.权利要求10所述的嵌合抗原受体， 所述跨膜结构域选自 以下蛋白质的跨膜结构域： TCRα链、 TCRβ 链、 TCRγ链、 TCRδ链、 CD3ζ亚基、 CD3ε亚基、 CD3γ亚基、 CD3δ亚基、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8α 、 CD9、 CD16、 CD2 2、 CD33、 CD28、 CD37、 CD64、 CD 80、 CD86、 CD134、 CD137和CD154。 12.权利要求10所述的嵌合抗原受体， 所述胞内信号传导结构域选自以下蛋白的胞内 区： FcRγ、 FcRβ 、 CD3γ、 CD3 δ、 CD3 ε、 CD3ζ、 CD2 2、 CD79a、 CD79b和CD6 6d。 13.权利要求10所述的嵌合抗原受体， 所述嵌合抗原受体还包含一个或多个共刺激结 构域， 其选自以下蛋白质的共刺激信号传导结构域： CD94、 LTB、 TLR1、 TLR2、 TLR3、 TLR4、 TLR5、 TLR6、 TLR7、 TLR8、 TLR9、 TLR10、 CARD11、 CD2、 CLAUDIN18.2、 CD8、 CD18、 CD27、 CD28、权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115403671 A 2CD30、 CD40、 CD54、 CD83、 CD134(OX40)、 CD137(4 ‑1BB)、 CD270(HVEM)、 CD272(BTLA)、 CD276 (B7‑H3)、 CD278(ICOS)、 CD357(GITR)、 DAP10、 LAT、 NKG2C、 SLP76、 PD ‑1、 LIGHT、 TRIM以及 ZAP70。 14.一种工程 化免疫细胞， 其包 含权利要求10 ‑13任一项所述的嵌合 抗原受体。 15.权利要求14所述的工程化免疫细胞， 其选自T细胞、 NK细胞、 NKT细胞、 巨噬细胞、 树 突细胞。 16.权利要求15所述的工程化免疫细胞， 其中所述T细胞选自CD4+/CD8+T细胞、 CD4+辅 助T细胞、 CD8+T细胞、 肿瘤浸润细胞、 记忆T细胞、 幼稚T细胞、 CD4 ‑CD8‑T细胞、 调节性T细胞、 γ δ‑T细胞、 α β ‑T细胞。 17.权利要求14所述的工程化免疫细胞， 其还包含靶向其他肿瘤抗原的第二嵌合抗原 受体。 18.权利要求14 ‑17任一项所述的工程化免疫细胞， 其进一步表达细胞因子， 所述细胞 因子选自IL7、 XCL1、 XCL2或其组合。 19.一种抗体偶联物， 其包含权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体或权利要求6或7所述 的多特异性抗体和第二功能性结构， 其中所述第二功能性结构 选自Fc、 放射性同位素、 延 长 半衰期的结构部分、 可检测标记 物和药物。 20.权利要求19所述的抗体偶联物， 其中所述延长半衰期的结构部分选自： 白蛋白的结 合结构、 转铁蛋白的结合结构、 聚乙二醇分子、 重组聚乙二醇分子、 人血清白蛋白、 人血清白 蛋白的片段和结合人血清白蛋白的白多肽； 所述可检测标记物选自荧光 团、 化学发光化合 物、 生物发光 化合物、 酶、 抗 生素抗性基因和造影剂； 所述药物选自细胞毒素和免疫调节剂。 21.一种检测试剂盒， 其包含权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体、 权利要求6或7所述 的多特异性抗体、 权利要求10 ‑13任一项所述的嵌合抗原受体、 权利要求14 ‑18任一项所述 的工程化免疫细胞， 或权利要求19或20所述的抗体偶联物。 22.一种药物组合物， 其包含权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体、 权利要求6或7所述 的多特异性抗体、 权利要求10 ‑13任一项所述的嵌合抗原受体、 权利要求14 ‑18任一项所述 的工程化免疫细胞， 或权利要求19或20所述的抗体偶联物， 和一种或多种药学上可接受的 赋形剂。 23.权利要求1 ‑5任一项所述的纳米抗体、 权利要求6或7所述的多特异性抗体、 权利要 求10‑13任一项所述的嵌合抗原受体、 权利要求14 ‑18任一项所述的工程化免疫细胞、 权利 要求19或20所述的抗体偶联物或权利要求22所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防 和/或诊断与Claudi n18.2表达相关的疾病的药物中的用途。 24.权利要求23所述的用途， 其中所述与Claudin18.2表达相关的疾病选自食管癌、 胃 肠癌、 胰腺癌、 甲状腺癌、 结直肠癌、 肾癌、 肺癌(例如非小细胞肺癌)、 肝癌、 胃癌、 胃食管交 界处(GEJ)腺癌、