(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111474258.1 (22)申请日 2021.12.0 3 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114031690 A (43)申请公布日 2022.02.11 (73)专利权人 广州百暨基因科技有限公司 地址 510000 广东省广州市经济技 术开发 区科学城开源大道 206号第3层 (72)发明人 李光超　罗敏　周兆　王学俊　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 戴志攀 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01)C12N 5/10(2006.01) C12N 15/867(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) 审查员 王康 (54)发明名称 靶向CCR1和NKG2D配体的嵌合抗原受体及其 应用 (57)摘要 本发明涉及一种靶向CCR1和NKG2D配体的嵌 合抗原受体及其应用， 包括 从氨基端到羧基端依 次连接的抗原结合结构域、 铰链区、 跨膜结构域、 共刺激结构域和 信号转导结构域； 所述抗原结合 结构域包括抗CCR1单链抗体和NKG2D。 利用本发 明上述同时靶向CCR1及NKG2D配体的嵌合抗原受 体构建的CAR ‑T细胞， 对CCR1及NKG2D配体阳性肿 瘤细胞具有特异性靶向作用， 体外杀伤作用显 著， 能够有效清除CCR1及NKG2D配体单/双阳性肿 瘤细胞， 减少抗原逃逸， 在肿瘤治疗领域具有重 要意义。 权利要求书1页 说明书9页 序列表8页 附图5页 CN 114031690 B 2022.07.15 CN 114031690 B 1.一种靶向CCR1和NKG2D配体的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体的氨基 酸序列如SEQ  ID NO： 4所示。 2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体的氨基端还具 有信号肽。 3.一种核酸， 其特 征在于， 其编码权利要求1～ 2任一项所述的嵌合 抗原受体。 4.根据权利要求3所述的核酸， 其特征在于， 所述核酸的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 6所 示。 5.一种重组载体， 其特 征在于， 所述重组载体含有权利要求3或4所述的核酸。 6.一种CAR ‑T细胞， 其特征在于， 其含有权利要求3或4所述的核酸或被权利要求5所述 的重组载体所转 化。 7.权利要求1～2任一项所述的嵌合抗原受体、 权利要求3或4所述的核酸、 权利要求5所 述的重组载体或权利要求6所述的CAR ‑T细胞在制备用于治疗癌症的药物中的应用。 8.一种药物 组合物， 其特征在于， 包括权利要求6所述的CAR ‑T细胞， 以及药学上可接受 的辅料。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114031690 B 2靶向CCR1和NKG2D配体的嵌合 抗原受体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物技术领域， 特别是涉及一种靶 向CCR1和NKG2D配体的嵌合抗 原受体及其应用。 背景技术 [0002]近年来， 嵌合抗原受体T细胞(CAR  T)疗法在肿瘤治疗中展现出非常好的疗效。 CAR‑T疗法的全称是Chi meric antigen receptor T cell therapy， 即嵌合抗原受体T细胞 疗法， 原理是应用患者自身的T淋巴细胞， 经过实验室重新改造， 装载上具有识别肿瘤抗原 的受体及 共刺激分子， 体外扩增 后再次回输入患者体内， 从而识别并攻击自身的肿瘤细胞。 T细胞也叫T淋巴细胞， 是人体白细胞的一种， 来源于骨髓造血干细胞， 在胸腺中成熟， 然后 移居到人体血液、 淋巴和周围组织器官， 发挥免疫功能， 其能够抵御和消灭感染、 肿瘤、 外来 异物等。 在实验室， 技术人员通过基因工程技术， 将T细胞激活， 并装上定位导航装置CAR(嵌 合抗原受体)， 将T细胞改造成CAR ‑T细胞， 其利用嵌合抗原受体， 专门识别体内肿瘤细胞， 并 通过免疫作用释放大量的多种效应因子， 它们能高效地杀灭肿瘤细胞， 从而达到治疗恶性 肿瘤的目的。 [0003]但是， 目前的嵌合 抗原受体存在较大的抗原逃逸问题， 影响了肿瘤治疗的效果。 发明内容 [0004]基于此， 有必要提供一种能够减少抗原逃逸的嵌合 抗原受体。 [0005]一种靶向CCR1和NKG2D配体的嵌合抗原受体， 其包括从氨基端到羧基端依次连接 的抗原结合结构域、 铰链区、 跨膜结构域、 共刺激结构域和信号转导结构域； 所述抗原结合 结构域包括 抗CCR1单链抗体和NKG2D。 [0006]本发明构建了一种同时靶 向CCR1及NKG2D配体的嵌合抗原受体， 其包括抗原结合 结构域、 铰链区、 跨膜结构域、 共刺激结构域和信号转导结构域， 抗原结合结构域包括了抗 CCR1单链抗体和NKG2D分子。 利用本发明上述同时靶向CCR1及NKG2D配体的嵌合抗原受体构 建的CAR‑T细胞， 对CCR1及NKG2D配体阳性肿瘤细胞具有特异性靶向作用， 体外杀伤作用显 著， 能够有效清除CCR1及NKG2D配体单/双阳性肿瘤细胞， 减少抗原逃逸， 在肿瘤 治疗领域具 有重要意 义。 [0007]在其中一个实施例中， 所述抗CCR1单链抗体包括抗CCR1抗体轻链 可变区和抗CCR1 抗体重链可变区， 所述抗CCR1抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 1所示， 所述抗 CCR1抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 2所示。 [0008]在其中一个实施例中， 所述 NKG2D的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 3所示。 [0009]在其中一个实施例中， 所述铰链区选自以下至少一种蛋白的铰链区： CD28、 CD3ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD 8、 CD9、 CD16、 CD2 2、 CD33、 CD37、 CD134、 CD137、 ICOS和CD154； 和/或 [0010]所述跨膜结构域选 自以下至少一种蛋白的跨膜区： T细胞受体的α、 β 或ζ链、 CD28、 CD3ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD37、 CD64、 CD80、 CD86、 CD134、 CD137、说　明　书 1/9 页 3 CN 114031690 B 3