(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111565277.5 (22)申请日 2021.12.20 (71)申请人 中国医学 科学院生物医学工程研究 所 地址 300110 天津市南 开区白堤路23 6号 (72)发明人 刘兰霞　邓博　马莹莹　 (74)专利代理 机构 北京华进京联知识产权代理 有限公司 1 1606 代理人 王勤思 (51)Int.Cl. A61K 39/00(2006.01) A61K 39/39(2006.01) A61K 39/385(2006.01) A61K 47/65(2017.01) A61K 47/69(2017.01)A61K 31/704(2006.01) A61K 31/409(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗及其制备 方法 (57)摘要 本发明涉及一种肿瘤微环境响应性原位纳 米疫苗及其制备方法， 包括制备两亲性单体分子 的步骤以及两亲性单体分子自组装成肿瘤微环 境响应性原位纳米疫苗的步骤； 两亲性单体分子 包含依次连接的疏水性功能分子、 环 境响应性连 接分子和亲水性功能分子， 制备两亲性单体分子 的步骤包括： 连接疏水性功能分子和环境响应性 连接分子， 制备中间连接产物； 连接中间连接产 物和亲水性功能分子， 制备两亲性单体分子； 疏 水性功能分子为疏水性佐剂分子， 亲水性功能分 子为亲水性化疗药物分子， 或者， 疏水性功能分 子为疏水性化疗 药物分子， 亲水性功能分子为亲 水性佐剂分子。 本发明通过对制备工艺的整体优 化， 有效提升纳米原位疫苗的合成效率。 权利要求书2页 说明书11页 附图7页 CN 114288395 A 2022.04.08 CN 114288395 A 1.一种肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包括 制备两亲性单体分子的步骤以及所述两亲性单体分子 自组装成肿瘤微环境响应性原位纳 米疫苗的步骤； 所述两亲性单体分子包含依次连接的疏水性功能分子、 环境响应性连接分子和亲水性 功能分子， 制备所述两亲性单体分子的步骤 包括： 连接所述疏 水性功能分子和所述环境响应性连接分子， 制备中间连接产物； 连接所述中间连接产物和所述亲 水性功能分子， 制备 所述两亲性单体分子； 所述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子， 所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分 子， 或者， 所述疏水性功能分子为疏水性化疗药物分子， 所述亲水性功能分子为亲水性佐剂 分子。 2.根据权利要求1所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 制 备所述两亲性单体分子的步骤 包括： 混合所述疏 水性功能分子和第一活化剂进行第一活化反应， 制备第一活化产物； 混合所述第 一活化产物和所述环境响应性连接分子进行第 一连接反应， 制备所述中间 连接产物； 混合所述中间连接产物和第二活化剂进行第二活化反应， 制备第二活化产物； 混合所述第 二活化产物和所述亲水性功能分子进行第 二连接反应， 制备所述两亲性单 体分子。 3.根据权利要求2所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所 述第二活化反应的条件 包括： 温度为32℃ ‑42℃， 时长为3.5 h‑4.5h。 4.根据权利要求2所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所 述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子， 所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分子， 则制 备所述两亲性单体分子的步骤还包括： 向所述第二活化产 物和所述亲水性功能分子中加入 催化剂再进行 所述第二连接反应， 所述催化剂包 含4‑二甲氨基吡啶。 5.根据权利要求2至4任一项所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特 征在于， 所述第一活化反应的条件包括： 温度为22℃ ‑28℃， 时长为2h ‑4h； 或/和， 所述第一 活化剂包含N,N ’ ‑羰基二咪唑； 或/和， 所述疏水性功能分子和所述第一活化剂的质量比为 (0.75‑1.5):(1‑2)； 或/和， 所述第一连接反应的条件包括： 温度为22℃ ‑28℃， 时长为24h ‑48h； 或/和， 所述疏水性 功能分子和所述环境响应性连接分子的质量比为(0.75 ‑1.5):(2‑4)； 或/和， 所述第二活化剂包含质量比为(3.3 ‑6.6):(1‑2)的1,2‑二氯乙烷和N ‑羟基丁二酰亚 胺。 6.根据权利要求2至4任一项所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特 征在于， 所述第二连接反应的条件 包括： 温度为2 2℃‑28℃， 时长为24h ‑48h。 7.根据权利要求2至4任一项所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特 征在于， 所述疏水性功能分子为疏水性化疗药物分子， 所述亲水性功 能分子为亲水性佐剂 分子， 每0.75mg ‑1.5mg所述疏水性功能分子对应的所述亲水性功能分子的用量为5OD ‑ 10OD；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114288395 A 2所述疏水性功能分子为疏水性佐剂分子， 所述亲水性功能分子为亲水性化疗药物分 子， 每0.75mg ‑1.5mg所述疏 水性功能分子对应的所述亲 水性功能分子的用量 为1.5mg‑3mg。 8.根据权利要求1至4任一项所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特 征在于， 所述疏水性化疗药物分子包含紫杉 醇、 奥沙利铂、 吲哚菁 绿和血卟啉及其衍生物中 的一种或者多种， 或/和， 所述亲水性佐剂包含QS21、 CpG  ODN及其类似物中的一种或者多 种， 或/和， 所述亲水性化疗药物分子包含盐酸阿霉素、 柔红霉素和IR820中的一种或者多 种， 或/和， 所述疏水佐剂分子包含单磷脂酰A和咪喹莫特及其类似物中的一种或者多种； 或/和， 所述环境响应性连接 分子包含基质金属蛋白酶响应性多肽、 肿瘤穿透肽和酶解α ‑乳 白蛋白多肽中的一种或者多种。 9.根据权利要求8所述的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所 述环境响应性连接分子包含氨基酸序列如SEQ  ID No.1至SEQ  ID No.3所示的多肽分子中 的一种或者多种。 10.权利要求1至9任一项所述的制备 方法制备的肿瘤微环境响应性原位纳米疫苗。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114288395 A 3