(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111501701.X (22)申请日 2021.12.09 (66)本国优先权数据 202011596224.5 2020.12.2 9 CN (71)申请人 杭州观苏生物技 术有限公司 地址 310051 浙江省杭州市滨江区江陵路 2028号， 星耀城I I期3号楼1901室 (72)发明人 仓勇　刘艺惠　蒋剑平　施晟　 (74)专利代理 机构 北京慧而行专利代理事务所 (普通合伙) 11841 专利代理师 李锐 (51)Int.Cl. A61K 38/48(2006.01) A61K 9/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 瘤内注射变异胶原酶治 疗癌症的方法 (57)摘要 本发明涉及瘤内注射变异胶原酶治疗癌症 的方法。 本发明提供了一种治疗癌症的方法， 其 特征在于， 在患有癌症的个体的肿瘤内注射包含 变异胶原酶的组合物， 以减少肿瘤微环境的细胞 外基质内的胶原蛋白的丰度。 利用本发明的方 法， 可降低肿瘤的僵硬度和体积以及协助免疫细 胞的浸润， 特别是细胞毒 性T淋巴细胞(CT L)的浸 润增加。 当与免疫检查点阻断疗法、 靶向疗法和 化学疗法相结合时， 本发明提供的变异胶原酶注 射剂具有协同的抗肿瘤活性。 权利要求书1页 说明书9页 序列表5页 附图7页 CN 114681596 A 2022.07.01 CN 114681596 A 1.一种治疗癌症的方法， 其特征在于， 在患有癌症的个体的肿瘤内注射包含变异胶原 酶的组合物， 以减少肿瘤微环境的细胞外基质内的胶原蛋白的丰度。 2.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述肿瘤为实体瘤； 优选的， 所述肿瘤选自由 黑色素瘤、 胰腺癌、 胆管癌、 乳腺癌、 大肠癌、 卵巢癌、 肺癌组成的组中的任一种； 更优选的， 所述肿瘤为选自由黑色素瘤、 胰腺癌和胆管癌组成的组的任一种。 3.如权利要求1或2所述的方法， 其特征在于， 所述组合物中的变异胶原酶为纯度98％ 以上的重组变构变异胶原酶； 优选的， 所述重组变构变异胶原酶为由溶组织梭菌表达的变 异胶原酶ColH的451位点被突变为 天冬氨酸， 所述重组变构变异胶原酶的氨基酸序列如SEQ   ID NO： 2所示。 4.如权利要求1 ‑3中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述注射为多点位注射或两点位 注射， 所述变异胶原酶在所述组合物中的浓度为0.0 05～0.15mg/10 0 μl。 5.如权利要求1 ‑4中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述方法可以与化学药物治疗、 免疫治疗或靶向治疗联合应用。 6.包含变异胶原酶的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。 7.如权利要求6所述的用途， 其特征在于， 所述癌症为恶性肿瘤； 优选的， 所述癌症自由 黑色素瘤、 胰腺癌、 胆管癌、 乳腺癌、 大肠癌、 卵巢癌、 肺癌组成的组中的任一种； 更优选的， 所述癌症为选自由黑色素瘤、 胰腺癌和胆管癌组成的组的任一种。 8.如权利要求6或7所述的用途， 其特征在于， 所述组合物中的变异胶原酶为纯度98％ 以上的重组变构变异胶原酶； 优选的， 所述重组变构变异胶原酶为由溶组织梭菌表达的变 异胶原酶ColH的451位点被突变为 天冬氨酸， 所述重组变构变异胶原酶的氨基酸序列如SEQ   ID NO： 2所示。 9.如权利要求6 ‑8中任一项所述的用途， 其特征在于， 所述组合物进一步包括药学上可 接受的载体。 10.如权利要求6 ‑9中任一项所述的用途， 其特征在于， 所述组合物的剂型为注射剂； 优 选的， 所述注射剂为注射液或粉针。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114681596 A 2瘤内注射 变异胶原酶治疗癌症的方 法 [0001]优先权和相关申请 [0002]本申请要求2020年12月29 日提交的名称为 “瘤内注射胶原酶治疗癌症的方法 ”的 中国专利申请202011596224.5的优 先权， 该申请包括附录在内的全部内容作为参考并入本 申请。 技术领域 [0003]本发明属于生物药品的癌症治疗方法应用领域， 具体涉及瘤内注射变异胶原酶治 疗癌症的方法。 背景技术 [0004]癌症是现今世界上公共卫生的棘手问题之一， 20 18年大约有1800万癌 症患者， 960 万人死于癌症， 也就 是每六人中有一人死于癌症[1,2]。 世界卫生组织预测， 到20 40年， 全世界 将有2940万癌症患者[1]。 为了治疗癌症， 找到有效的癌症治疗方法成为了重要任务。 黑色素 瘤、 胰腺癌和胆管癌这一类以肿瘤 纤维化为特征 的疾病值得注意， 因为其肿瘤微环境的纤 维化， 为免疫细胞或药物的作用带来了更多困难。 2020年， 全球有大约32万黑色素瘤患者、 50 万胰腺癌 患者， 并且 胰腺癌也成为了第七高死 亡人数的癌症， 约47万人[3,4]。 [0005]如今， 治疗癌 症的方法主要 分为： 手术切除、 放射疗法、 抗癌药物疗法  (化学疗法) 以及免疫阻断抑制剂联合疗法。 然而基于肿瘤的特性， 让靶向药物有效的到达肿瘤细胞并 产生作用成为了难题。 肿瘤的细胞外基质， 如胶原蛋白和透明质酸， 会促进肿瘤的增长和转 移， 成为天然的药物 扩散屏障， 阻断淋巴细胞和靶向药物的浸润[5,6]。 例如， 胶原蛋白参与癌 组织的纤维化， 并且在胶原蛋白充足的区域， 纤连蛋白、 透明质酸、 层粘连蛋白和基质金属 蛋白酶与胶原蛋白作用影响癌细胞。 又如， 透明质酸是一种糖胺聚糖， 它聚集在肿瘤细胞表 面及其周围空间。 在免疫细胞向肿瘤的行进中， 透明质酸构成了一道屏障， 并压迫血管、 阻 碍化疗的进 行。 因此对于纤维化的、 硬质的肿瘤， 现有的抗肿瘤 疗法也并不能很好的发挥作 用， 近几年 来， 大家在积极的找寻能够协助治疗的通路。 [0006]实体瘤的结构复杂， 既包含了肿瘤细胞， 也包含了脉管系统、 细胞外基质、 基质细 胞和免疫细胞。 其中， 肿瘤微环境占肿瘤块的较大部 分， 细胞外基质是肿瘤微环境中最丰富 的成分， 而胶原 蛋白和透明质酸又在细胞外基质中最丰富[6]。 有研究发现肿瘤微环境出现 细胞外基质和间质成分改变， 是可能影响治疗效果和 导致组织僵硬的因素， 也提出肿瘤的 硬度与富含胶原蛋白和成纤维细胞的肿瘤体积正相关， 进一步分析也发现胶原蛋白的密度 与肿瘤的硬度 呈正相关， 但透 明质酸的密度与肿瘤的硬度并未显著相关[6,7]。 在实体瘤中， 细胞外基质的作用与在正常器官内有所不同， 瘤内信号传导、 转运机制、 新陈代谢、 氧合作 用和免疫原性都受到细胞外基质的影响。 也有研究提出， 胶原蛋白不仅构成肿瘤微环境的 支架， 而且能够影响肿瘤微环境， 参与到 了肿瘤进 展的过程[8]。 [0007]一个理想的抗癌方法是能够在杀死癌细胞的同时不伤害正常的细胞， 现有的化疗 药物并没没有很好的解决这一问题， 因此有了一系列的通过利用肿瘤的特异 性免疫活性的说　明　书 1/9 页 3 CN 114681596 A 3