(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111435181.7 (22)申请日 2021.11.29 (71)申请人 河南大学 地址 475004 河南省开封市龙亭区金明大 道北段 (72)发明人 王家富　张英昊　孟疆辉　戴小龙　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 代理人 张梦泽 (51)Int.Cl. A61K 31/713(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 7/01(2006.01) C12N 5/10(2006.01) (54)发明名称 敲低VAMP5基因表达的制剂在制备治疗脑胶 质瘤的药物中的应用 (57)摘要 本发明提供了敲低VAMP5基因表达的制剂在 制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用， 属于生物化 学及分子生物学技术领域。 VAMP5基因能够作为 治疗脑胶质瘤的靶点， 敲低VAMP5基因表达能够 治疗脑胶质瘤。 经过实验证明， 敲低人脑胶质瘤 中的VAMP5基因后抑制了胶质瘤细胞贴壁形态的 形成、 细胞的增殖和迁移能力， 慢病毒VAMP5敲低 组相对于对照组能够使较低等级和部分高等级 的脑胶质瘤细胞 逐渐死亡。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图5页 CN 114099537 A 2022.03.01 CN 114099537 A 1.敲低VAMP5基因表达的制剂在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述敲低VAMP5基因表达的制剂包括 shRNA， shRNA敲低的V AMP5基因的mRNA靶序列的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 3.一种敲低V AMP5基因表达的shRNA， 包 含碱基互补配对的正 义链和反义链； 所述正义链的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； 所述反义链的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示。 4.一种敲低VAMP5基 因表达的重 组慢病毒载体， 以pHBLV ‑U6‑MCS‑ZsGreen‑PGK‑PURO或 pHBLV‑U6‑MCS‑PGK‑PURO为骨架， 插 入有权利要求3所述的shRNA。 5.根据权利要求 4所述的重组慢病毒载体， 其特 征在于， 所述shRNA通过U6启动子表达 。 6.一种重组慢病毒， 经权利要求 4或5所述重组慢病毒载体转染细胞系， 包 装获得。 7.权利要求3所述的shRNA或者权利 要求4或5所述的重组慢病毒载体或权利要求7所述 的重组慢病毒在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于， 所述脑胶质瘤包括 LNZ308和/或A172。 9.一种治疗脑胶质瘤的药物， 所述药物中包含权利要求6所述重组慢病毒和药学上可 接受的辅料。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114099537 A 2敲低VAMP5基因表达的制剂在制备治疗脑胶质瘤的药物中的 应用 技术领域 [0001]本发明属于生物化学及分子生物学技术领域， 具体涉及敲低VAMP5基因表达的制 剂在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。 背景技术 [0002]脑胶质瘤是由于大脑或脊髓胶质细胞癌变所产生， 是临床上最常见的中枢神经系 统恶性肿瘤， 占原发性脑肿瘤的33％～ 45％， 恶性脑肿瘤的约 80％， 超过95％的病人的存活 期无法超过5年， 具有发病率高、 复发率高、 易转移、 死亡率高以及治愈率低的特点。 脑胶质 瘤按照WHO分类， 按照肿瘤恶性程度递增分为I ‑IV型， 其中WHO  IV型恶性程度最高， 又称为 胶质母细胞瘤(glioblastoma  multiform， GBM)。 近些年来虽然在脑胶质瘤的治疗， 如外科 手术切除、 放疗和化疗方面取得了一些进展， 但整体上仍然缺乏足够的治疗手段。 手术切除 仍然是脑胶质瘤最有效的治疗方法， 但是受制 于脑胶质瘤易扩散、 肿瘤与正常组织间边界 不清晰的特征， 手术难以切除干净因此导致了复发率高。 虽然目前已有大量的脑胶质瘤基 因组测序结果， 但是脑胶质瘤的致病机理仍然未研究清楚， 缺少用于脑胶质瘤治疗的基因 靶点。 发明内容 [0003]有鉴于此， 本发明的目的在于提供敲低VAMP5基因表达的制剂在制备治疗脑胶质 瘤的药物 中的应用， VAMP5基因能够作为治疗脑胶质瘤的靶点， 敲低VAMP5基因表达能够治 疗脑胶质瘤。 [0004]本发明提供了敲低V AMP5基因表达的制剂在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。 [0005]优选的， 所述敲低VAMP5基因表达的制剂包括shRNA， shRNA敲低的VAMP5基因的 mRNA靶序列的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示 [0006]本发明提供了一种敲低VAMP5基因表达的sh RNA， 包含碱基互补 配对的正义链和反 义链； [0007]所述正义链的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； [0008]所述反义链的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示； [0009]本发明还提供了一种敲低VAMP5基因表达的重组慢病毒载体， 以pHBLV ‑U6‑MCS‑ ZsGreen‑PGK‑PURO或pHBLV ‑U6‑MCS‑PGK‑PURO为骨架， 插 入有上述方案所述的shRNA。 [0010]优选的， 所述shRNA通过U6启动子表达 。 [0011]本发明还提供了一种重组慢病毒， 经上述方案所述重组慢病毒载体转染细胞系， 包装获得。 [0012]本发明还提供了上述方案所述的sh RNA或者所述的重组慢病毒载体或所述的重组 慢病毒在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。 [0013]优选的， 所述脑胶质瘤包括 LNZ308和/或A172。说　明　书 1/9 页 3 CN 114099537 A 3