(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111555160.9 (22)申请日 2021.12.17 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： C2021 104 2021.1 1.30 (71)申请人 中国农业科 学院上海兽医研究所 （中国动物卫 生与流行病学中心上 海分中心） 地址 200241 上海市闵行区紫月路518号 (72)发明人 李泽君　李雪松　石晓娜　 (74)专利代理 机构 上海序伦律师事务所 31276 专利代理师 周东萍 (51)Int.Cl. C07K 16/08(2006.01) C12N 5/20(2006.01) G01N 33/569(2006.01)G01N 33/577(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 31/22(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 抗马立克氏病毒 单克隆抗体、 其杂交瘤细胞 株及检测试剂盒应用 (57)摘要 本发明公开了一种抗马立克氏病毒单克隆 抗体。 本发 明还公开了马立克氏病毒抗体检测试 剂盒， 以及上述单克隆抗体在制备诊断或治疗马 立克氏病的产品中的应用。 本发 明利用抗马立克 氏病毒的单克隆抗体制备的检测马立克氏病毒 抗体的阻断ELISA试剂盒， 特异性强、 敏感性高， 在马立克氏病毒的流行病学调查、 疫苗免疫效力 评估和马立克氏病的诊断方面具有很好的应用 前景。 权利要求书1页 说明书10页 附图1页 CN 114656552 A 2022.06.24 CN 114656552 A 1.一种抗马立克氏病毒单 克隆抗体。 2.根据权利要求1所述的单克隆抗体， 其特征在于， 所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC   NO： C2021 104的杂交瘤 细胞株产生。 3.一种分泌产生权利要求1所述 抗马立克氏病毒单 克隆抗体的杂交瘤 细胞株。 4.根据权利要求3所述的杂交瘤细胞株， 其特征在于， 该杂交瘤细胞株的保藏号为 CCTCC NO： C2021 104。 5.一种马立克氏病毒抗体检测试剂盒， 其特征在于， 包含权利要求1或2所述的单克隆 抗体。 6.根据权利要求5所述的马立克氏病 毒抗体检测试剂 盒， 其特征在于， 还包含马立克氏 病毒抗原包被的ELISA酶标板、 阳性对照血清、 阴性对照血清、 样品稀释液、 10倍浓缩洗涤 液、 马立克氏病毒单 克隆抗体、 酶标二 抗、 显色液、 终止液、 封 板膜和试剂盒说明书。 7.根据权利要求6所述的马立克氏病 毒抗体检测试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒采用 阻断ELISA方法检测马立克氏病毒抗体， 包括以下步骤： 用纯化的马立克氏病毒抗原包被EL ISA酶标板； 将待测血清样品与包被抗原作用后， 依次加入权利要求1或2所述的单克隆抗体、 酶标 二抗、 显色液和终止液； 利用酶标仪读取吸光度值OD450nm,并按公式： 阻断率(％)＝(阴性对照 孔平均OD450nm值‑ 样品孔平均OD450nm值)/阴性对照孔平均OD450nm值×100％， 计算待测血清样品的阻断率， 得 检测结果。 8.根据权利要求7所述的马立克氏病 毒抗体检测试剂 盒， 其特征在于， 所述检测结果的 判定标准为： 阻断率≥26.4％时为马立克氏病毒抗体阳性； 阻断率≤19.2％时为马立克氏 病毒抗体阴性； 19.2％＜阻断率＜26.4％时为可疑， 需重复检测， 若重复检测结果阻断率仍 小于26.4％， 则判定为马立克氏病毒抗体阴性。 9.权利要求1或2所述单 克隆抗体在制备诊断或治疗马立克氏病的产品中的应用。 10.权利要求5 ‑8任一项所述马立克氏病毒抗体检测试剂盒在制备诊断马立克氏病的 产品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114656552 A 2抗马立克氏病毒单克隆抗体、 其杂交瘤细胞株及检测试剂盒 应用 技术领域 [0001]本发明涉及 兽用诊断生物制品技术领域， 尤其涉及一种抗马立克氏病毒单克隆抗 体、 其 杂交瘤细胞株、 以及包 含该单克隆抗体的马立克氏病毒抗体阻断EL ISA检测试剂盒。 背景技术 [0002]马立克氏病(Marek ’disease， MD)是由马立克氏病毒(Marek ’s disease virus， MDV)引 起的鸡的一种恶性淋巴组织增生性肿瘤病。 能够引起感染鸡的内脏和皮肤出现肿 瘤， 同时侵  袭感染鸡的中枢神经系统， 导致感染鸡出现瘫痪或死亡的现象。 在接种HVT(马 立克氏病火  鸡疱疹病毒疫苗)或者CV I‑988疫苗(鸡马立克氏病活疫苗)后， MDV在鸡群中诱 发肿瘤的  这种病例屡见不鲜， 给国内养禽业造成了巨大的经济损失。 急需开 发特异性诊断 马立克氏病  和有效监测MDV免疫抗体的试剂盒。 [0003]马立克氏病毒(Marek ’s disease virus， MDV)是属于疱疹病毒科， α ‑疱疹病毒亚 科， 马 立克病毒属。 MDV病毒粒子呈典型的疱疹病毒形态。 病毒粒子有两种存在形式： 一种 是完整 的带有囊膜的病毒粒子， 直径约为273 ‑400nm， 主要存在于鸡羽毛囊 上皮细胞中， 其 抵抗力较  强； 另一种是没有囊膜的病毒粒子， 其直径约为85 ‑100nm， 是严格的细胞结合性 病毒， 其抵  抗力较弱。 MDV的主要传染源 是病鸡和带毒鸡， 感染鸡的羽毛囊上皮细胞内如果 存在病毒，  即可通过水平传播的方式进行传播。 雏鸡最容易 感染MDV， 从病毒感染到发病有 较长的潜伏  期。 感染MDV病鸡的临床症状主要包括体重下 降、 间歇性肢体麻痹、 精神沉郁 等。 近些年来，  MDV毒力的不断增强， 部分病鸡3 ‑4周龄就出现肿 瘤， 8‑9周龄时肿瘤已经很 严重。 [0004]虽然根据该病的临床症状与剖检病变可以做出初 步诊断， 但仍应结合实验室检测 以确诊 该病。 目前鉴定马立克氏病毒通常采用的免疫 学方法有免疫荧光技术(FA)、 酶联免 疫吸附 试验(ELISA)、 病毒中和试验(VN)。 针对鸡羽毛囊的MDV还可以采用琼脂扩散试验 (AGP) 进行鉴定。 分子诊断马立克氏病毒的方法是针对特异性致病基因的诊断， 包括聚合 酶链式反  应(PCR)、 荧光定量PCR等。 但是， 这些鉴定诊断方法的敏感性 都不高， 需要研制更 高敏感 性的马立克氏病毒抗体 检测试剂盒。 发明内容 [0005]本发明要解决目前市场上缺乏高敏感性的马立克氏病毒抗体检测产品的技术问 题， 提供 一种抗马立克氏病毒单克隆抗体， 该单克隆抗体可用于快速、 灵敏地检测马立克 氏病毒， 对  马立克氏病毒的临床诊断及其疫苗免疫效力评估提供很好的方法和试剂盒。 [0006]为了解决上述 技术问题， 本发明通过如下技 术方案实现: [0007]在本发明的一个方面， 提供了一种抗马立克氏病毒单 克隆抗体。 [0008]优选的， 所述单 克隆抗体由保藏 号为CCTCC NO： C2021 104的杂交瘤 细胞株产生。 [0009]所述单克隆抗体的抗体亚类为 为IgG2a， 其轻链为 к链。说　明　书 1/10 页 3 CN 114656552 A 3